Detección de agentes virales en ostión Japonés (Crassostrea gigas)

Abstract

Las infecciones virales, capaces de provocar mortalidades masivas de peces, camarón y bivalvos, constituyen una amenaza real para la producción acuícola. En los años setenta, enfermedades provocadas por iridovirus condujeron a la eliminación del ostión Portugués (Crassostrea angulata) de importantes zonas de cultivo en Europa. De manera más reciente, se han detectado infecciones por virus de tipo herpes en varias especies de moluscos alrededor del mundo. Este tipo de infecciones han sido asociadas con mortalidades elevadas en Ostrea edulis y Crassostrea gigas.

La purificación del virus herpes de ostreidos (OsHV-1) permtió su caracterización y el desarrollo de diversas técnicas de detección específica entre las cuales destacan dos herramientas moleculares : la PCR y la hibridación in situ (HIS). Estos protocolos, si bien han demostrado su eficiencia, no han sido sometidos a un proceso de validación stricto sensu. Por tales motivos, se llevaron a cabo varias series de análisis de muestras de colección que contribuyen a la comparación y la evaluación de ambas técnicas. Los resultados obtenidos con tejidos fijados e incluídos en parafina revelaron que la técnica más eficaz para el diagnóstico de OsHV-1 es la PCR con primers que amplifican fragmentos pequeños (200 pb) de una región repetida del genoma viral. Adicionalmente, se observó que la fijación y el almacenamiento de este tipo de muestras son etapas esenciales que deben ser optimizadas para que la interpretación de los resultados sea posible. Por otra parte, ensayos inter-laboratorios demostraron la reproductibilidad de los resultados de la PCR y la necesidad de una mayor estandarización del protocolo de HIS empleado.

Mas allá de su evaluación, estas herramientas moleculares fueron empleadas para explorar dos hipótesis acerca de OsHV-1. En primer lugar, la detección de OsHV-1 en tres generaciones sucesivas de ostión Japonés (adultos reproductores y larvas) proporcionó datos que refuerzan la hipótesis de una transmisión vertical de este virus y sugieren la existencia de un mecanismo de defensa o resistencia contra la infección viral transmitido por las hembras a su progenie. En segundo lugar, la detección de OsHV-1 en una cantidad limitada de muestras de C. gigas de México indica que este tipo de infecciones pueden ser ubicuas. Sin embargo, se requieren muestreos y análisis adicionales para confirmar este resultado.

Debido al impacto que tienen tanto iridovirus como birnavirus en peces y moluscos cultivados, se han elaborado métodos de detección por PCR y RT-PCR con primers basados en regiones conservadas. En el caso de los iridovirus, el análisis de muestras de C. angulata fijadas e incluídas en parafina por PCR con primers dirigidos hacia el gen de la proteína principal de la cápside (MCP) generó productos de tamaño esperado (de 150 pb a 550 pb). Por otra parte, se diseñaron primers para la detección específica por RT-PCR de un birnavirus aislado del molusco Telina tenuis (TV-1). La metodología desarrollada en el presente estudio puede ser utilizada como herramienta para el diagnóstico de TV-1 en muestras de moluscos potencialmente infectados.