Mohos fitopatógenos del limón persa (Citrus latifolia T.) productores de micotoxinas y su inhibición con levaduras marinas.
Resumen
Los mohos además de causar deterioro y grandes pérdidas económicas en frutas y otros
alimentos, pueden sintetizar micotoxinas que representan un riesgo para la salud humana y
animal. El objetivo general fue caracterizar los mohos fitopatógenos de limón Persa (Citrus
latifolia T.) con capacidad micotoxigénica en un medio complejo a base de pericarpio de
limón y su inhibición con levaduras marinas. Para cumplir con los objetivos primero se
determinó la capacidad micotoxigénica de mohos fitopatógenos para el limón Persa por
medio de la búsqueda de secuencias que pertenecen a genes que participan en la biosíntesis
de micotoxinas, por PCR convencional. De los mohos positivos a secuencias de genes
micotoxigénicos se realizaron cultivos en un medio complejo a base de pericarpio de limón
Persa -que se le se denominó Agar Limón (AL)- en diferentes condiciones de pH, temperatura
y tiempo de incubación. Se determinó el grado de toxicidad de las micotoxinas producidas
por los mohos utilizando bioensayo de toxicidad con A. salina. Por último se identificaron y
cuantificaron las micotoxinas por HPLC-MS. Como segundo paso, se analizó la capacidad
de síntesis de micotoxinas sobre limón Persa infectado artificialmente con las cepas A. niger
y A. carbonarius; se analizaron las diferentes partes del limón y se determinó la difusión de
las micotoxinas en el fruto. Finalmente, se determinaron las condiciones para el biocontrol
de los mohos con la levadura marina Debaryomyces hansenii. En una primera etapa se
modelizó el crecimiento de los diferentes mohos sobre agar limón y se determinó la velocidad
de crecimiento teórico, así como el tiempo en que se hace visible la colonia. En la segunda
etapa, se evaluó la capacidad inhibitoria tanto de la levadura, como de los sobrenadantes de
su cultivo, esto último relacionado con la habilidad de las levaduras de producir proteínas
killer contra los microorganismos sensibles, para lo cual se realizaron retos de inhibición de
los mohos micotoxigénicos, in vitro, e in vivo. Se encontraron tres cepas positivas a genes
participantes en la biosíntesis de micotoxinas: A. alternata positiva al gen PKS (síntesis de
melanina, precursor de altertoxina), A. carbonarius positivo al gen PKS (enzima en la
policondensacion de cetonas, ruta de la OTA) y A. niger positivo al gen aflL (antes VerB) y
FUM1 (síntesis de aflatoxinas y fumonisinas respectivamente). Se determinó que los mohos
son capaces de sintetizar más de una micotoxina de interés alimentario en una amplia
variedad de condiciones. La infección artificial de limón Persa con las cepas A. niger y A.
carbonarius, confirmaron la utilización del limón Persa como sustrato para la síntesis de
micotoxina y se determinó que éstas son capaces de atravesar los tejidos del fruto. Se
determinó la velocidad de crecimiento y el tiempo en que aparece la colonia en cinco cepas
de A. niger. Durante su validación en el fruto los valores predichos mostraron discrepancias.
Finalmente se determinó que la levadura tiene capacidad para inhibir el crecimiento de los
mohos micotoxigénicos A. niger, A. carbonarius y A. alternata por antagonismo además de
presentar actividad killer.