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dc.contributor.advisorIbarra Humphries, Ana María
dc.contributor.authorLópez Flores, José Víctor
dc.date.issued2015es_MX
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/539
dc.description.abstractLa almeja mano de león (Nodipecten subnodosus) es el bivalvo más grande de la familia Pectinidae presente en Baja California Sur, y debido a su alta tasa de crecimiento y valor comercial se considera una especie atractiva para la acuicultura. Estudios recientes han demostrado que la condición de triploidía inducida en esta especie resulta en organismos completamente estériles. Tal esterilidad se ha propuesto que es una consecuencia de problemas presentados durante la meiosis, en los puntos de expresión de genes de “checkpoints” o de verificación del control de la fidelidad del ciclo meiótico. Entre los genes involucrados en la progresión del ciclo celular se sabe que las cinasas dependientes de ciclinas (CDK) participan en la progresión del ciclo celular, y que estas a su vez requieren ser activadas por una cinasa activadora de ciclina (CAK) proveyendo un control temporal sobre las mismas. Sin embargo, existe otro grupo de proteínas más recientemente descubiertas que pueden activar a las CDKs permitiendo la progresión del ciclo celular, la familia de proteínas nombrada como RINGO/Speedy. Dentro de esta familia de proteínas se encuentra p33 RINGO/Speedy la cual se considera importante para la maduración meiótica, y aunque inicialmente se le catalogó como un iniciador de la maduración del ovocito de Xenopus induciendo la transición de G2/M, también puede inducir la progresión de la fase G1/S y además puede evitar la activación de “Checkpoints”. La caracterización del gen p33 en almeja mano de león a partir de una secuencia parcial obtenida de librerías SSH indicó que el transcrito de este gen tiene una secuencia de 1288pb con una región codificante de 1017pb que traduce a una proteína de 338aa en el ORF+2. El análisis bioinformático comprobó que pertenece a la familia RINGO/Speedy, y el análisis filogenético la ubica junto con las otras secuencias de sus homólogos/ortólogos de los moluscos, sin embargo la comparación estructural de los modelos de Xenopus tropicalis y Crassostrea gigas nos dicen que ambas son diferentes a la proteína p33 de mano de león. El análisis de expresión relativa diferencial entre diploides y triploides por PCR-semicuantitativo indica que este gen se expresa en diploides en las primeras etapas de la gametogénesis y después del desove en machos, y en organismos triploides en los estadios gametogénicos inactivo-inicial, avanzado y desove de los diploides. Además se confirmó que p33 se expresa exclusivamente en la gónada durante la meiosis dado que el análisis de ubicuidad de la expresión en tejidos somáticos fue negativo. La localización de las células de expresión por hibridación in situ (ISH), indicó que p33 se expresa exclusivamente en las gonias, y comprobó lo obtenido en el experimento de expresión relativa, dado que fue posible localizar el transcrito de gen p33 en diploides en los inicios de la gametogénesis y en organismos desovados, y en triploides en todo el espacio temporal del análisis.es_MX
dc.language.isoEspañoles_MX
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.titleEvaluación del patrón de expresión y localización de células de expresión del gen p33-RINGO/Speedy durante la gametogénesis de la almeja mano de león (Nodipecten subnodosus) diploide y triploide.es_MX
dc.typeTesises_MX
dc.documento.idlopez_jes_MX
dc.documento.instCIBNORes_MX
dc.dirtesis.gradoMaestría en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturaleses_MX
dc.dirtesis.disciplinaAcuiculturaes_MX
dc.dirtesis.universidadCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.dirtesis.facultadPosgrado en Recursos Naturaleses_MX
dc.documento.fecha2015-05-18
dc.description.abstractenThe lion’s paw scallop (Nodipecten subnodosus) is the biggest bivalve of the Pectinidae family in Baja California Sur, and because of its high growth rate and its high commercial value makes it an attractive species for aquaculture. Recent studies have shown that the condition of triploidy in the lion’s paw scallop result in complete sterility. The sterility seen in triploids has been proposed as a consequence of problems present during meiosis, more specifically in gene expression of cell cycle checkpoints that controls and ensures the fidelity of cell division. Among the genes involved in the control of the cell cycle it is known that cyclin-dependent kinases (CDK) play a role in cell cycle progression and these in turn need to be activated by a cyclin-activated kinase (CAK) providing a temporal control over their activity. However there is another group of proteins recently discovered that can activate CDKs allowing the cell cycle to continue, named as RINGO/Speedy. Within this family of proteins is p33 RINGO/Speedy that is important for meiotic maturation, and although it was initially cataloged as an initiator of Xenopus oocyte maturation inducing the G2/M transition, it also may induce the progression in the G1/S phase and inhibit the activation of “checkpoints”. The characterization of p33Nsub gene in lion’s paw scallop from a partial sequence obtained of SSH libraries indicated that the gene transcript has a sequence of 1288bp with a coding region of 1017bp that translate into a protein of 338aa in the ORF+2. The bioinformatics analysis indicated that this gene belongs to the RINGO/Speedy family and the phylogenetic analysis placed it along the other sequences of its mollusks homologues/orthologous. However the structural comparison of the Xenopus tropicalis and Crassostrea gigas protein models indicated that the lion’s paw p33 protein is different. The analysis of relative expression between diploids and triploids by semiquantitative-PCR showed that gene expression in diploids occurs in the first stages of gametogenesis and after spawning, and in triploids at all three ages corresponding to inactive-early, advanced, and spawn stages in diploids. Furthermore it was confirmed that p33Nsub expression is exclusive for the gonad during meiosis given that the expression analysis in the somatic tissues was negative. The specific localization of expression by in situ hybridization (ISH) indicated that expression of p33 occurred in the gonia cells, and proved the results of relative expression as it was possible to localize the p33Nsub gene transcript in diploids at the beginning of gametogenesis and in spawned organisms, and in triploids in all the temporal space of the analysis.es_MX
dc.documento.subjectGametogénesis; ‘checkpoint’; diploide; triploide; expresión semicuantitativa; filogenia; ISHes_MX


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