Expresión de antígenos de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en Chlamydomonas reinhardtii

Abstract

La paratuberculosis (Enfermedad de Johne) es una enfermedad intestinal crónica en rumiantes causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). La primera generación de vacunas contra MAP, compuesta de bacterias completas (muerta o atenuada) en adyuvante de aceite, confiere solo una protección parcial, decreciendo la carga bacteriana en el intestino y retrasando la progresión de la enfermedad hacia la fase clínica. La nueva generación de vacunas debe ser desarrollada con el objetivo de obtener una mejor protección frente a la infección y de bajo costo. Las microalgas se han empleado como una eficiente biofábrica de vacunas de bajo costo y como una plataforma de administración oral para la salud animal y humana. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar la expresión de antígenos multiepitópicos de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en Chlamydomonas reinhardtii. La disponibilidad del genoma MAP K-10 permitió realizar una selección racional de epítopos de MAP1239c con potencial inmunogénico por análisis in silico: sin identidad con el hospedero, alta promiscuidad y afinidad a alelos de MHC (humanos, bovinos y de ratón) y una localización sub-celular expuesta. Los epítopos del antígeno Ag85B, capaces de inducir la producción de IL-2 e IFN-γ en modelo ratón, fueron seleccionados para el diseño de una vacuna multi-epítopo como control positivo. Los epítopos de MAP1239c fueron correctamente clonados dentro del vector pChlamy_4 y usados para transformar C. reinhardtii por el método de biobalística. La expresión de proteínas recombinantes fue determinada por ELISA usando los anticuerpos Anti-Histidina y Anti-CTB. Como conclusión, las vacunas múlti-epítopo basadas en los antígenos de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis fueron diseñadas y producidas en C. reinhardtii.