Expresión e inmunoreactividad de los antígenos MAP1609c y MAP0586c de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis producidos en alfalfa (Medicago sativa L.)

Abstract

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) es el agente epidemiológico de la Paratuberculosis; una enfermedad crónica gastrointestinal en rumiantes. Los antígenos recombinantes MAP1609c y MAP0586c han demostrado inmunoprotección en el modelo murino frente a un reto infeccioso experimental con MAP. Se ha sugerido el desarrollo de vacunas orales basadas en antígenos recombinantes producidas en plantas como una alternativa potencial para el control enfermedades infecciosas. Con base a lo anterior se formuló la hipótesis: si los antígenos MAP1609c y MAP9586c de MAP son expresados correctamente, su inmunoreactividad podrá ser evaluada utilizando anticuerpos de animales infectados naturalmente. El objetivo de este trabajo fue analizar la producción e inmunoreactividad de los antígenos MAP1609c y MAP0586c en alfalfa. Los embriones de plantas transgénicas fueron individualizados y analizados mediante un bioensayo de generación de callo y PCR de punto final, estableciéndose 50 líneas con el gen MAP0586c y 24 líneas con el gen MAP1609c. La expresión de antígenos recombinantes en alfalfa se analizó utilizando anticuerpos de animales infectados naturalmente con MAP siendo la línea 20 (MAP1609c) y 41 (MAP0586c), las de mayor expresión. La inmunoreactividad de extractos proteicos de las líneas 20 y 41 de alfalfa se analizó con 35 sueros distintos de animales infectados naturalmente observando diferencias en los títulos de anticuerpos mediante ELISA indirecta. Se expresaron los antígenos en Escherichia coli y fueron analizados mediante Western blot y ELISA indirecta utilizando anticuerpos específicos producidos en ratón mediante inmunización con ADNp. Se observaron diferencias significativas frente a extractos proteicos de E. coli entre los grupos de ratones inmunizados, siendo el grupo inmunizado con el gen MAP1609c el de mayor producción de anticuerpos específicos. Los datos obtenidos se analizaron mediante Análisis de Varianza de Rangos Kruskal-Wallis de una vía, ANOVA de una o dos vías dependiendo del experimento. Las proteínas recombinantes expresadas en alfalfa fueron reconocidas por anticuerpos de animales infectados naturalmente, siendo la línea 41 y 20 las de mayor expresión. Los antígenos recombinantes expresados en E. coli fueron reconocidos por anticuerpos de animales infectados naturalmente, así como por anticuerpos de animales inmunizados. Los ratones inmunizados con el gen MAP1609c generaron una respuesta inmune de tipo Th2 (humoral) mientras que los ratones inmunizados con el gen MAP0586c pudieron haber generado una respuesta Th1 (celular).