Expresión e inmunoreactividad de los antígenos MAP1609c y MAP0586c de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis producidos en alfalfa (Medicago sativa L.)
Resumen
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) es el agente epidemiológico de la
Paratuberculosis; una enfermedad crónica gastrointestinal en rumiantes. Los antígenos
recombinantes MAP1609c y MAP0586c han demostrado inmunoprotección en el modelo
murino frente a un reto infeccioso experimental con MAP. Se ha sugerido el desarrollo de
vacunas orales basadas en antígenos recombinantes producidas en plantas como una
alternativa potencial para el control enfermedades infecciosas. Con base a lo anterior se
formuló la hipótesis: si los antígenos MAP1609c y MAP9586c de MAP son expresados
correctamente, su inmunoreactividad podrá ser evaluada utilizando anticuerpos de animales
infectados naturalmente. El objetivo de este trabajo fue analizar la producción e
inmunoreactividad de los antígenos MAP1609c y MAP0586c en alfalfa. Los embriones de
plantas transgénicas fueron individualizados y analizados mediante un bioensayo de
generación de callo y PCR de punto final, estableciéndose 50 líneas con el gen MAP0586c
y 24 líneas con el gen MAP1609c. La expresión de antígenos recombinantes en alfalfa se
analizó utilizando anticuerpos de animales infectados naturalmente con MAP siendo la
línea 20 (MAP1609c) y 41 (MAP0586c), las de mayor expresión. La inmunoreactividad de
extractos proteicos de las líneas 20 y 41 de alfalfa se analizó con 35 sueros distintos de
animales infectados naturalmente observando diferencias en los títulos de anticuerpos
mediante ELISA indirecta. Se expresaron los antígenos en Escherichia coli y fueron
analizados mediante Western blot y ELISA indirecta utilizando anticuerpos específicos
producidos en ratón mediante inmunización con ADNp. Se observaron diferencias
significativas frente a extractos proteicos de E. coli entre los grupos de ratones
inmunizados, siendo el grupo inmunizado con el gen MAP1609c el de mayor producción
de anticuerpos específicos. Los datos obtenidos se analizaron mediante Análisis de
Varianza de Rangos Kruskal-Wallis de una vía, ANOVA de una o dos vías dependiendo
del experimento. Las proteínas recombinantes expresadas en alfalfa fueron reconocidas por
anticuerpos de animales infectados naturalmente, siendo la línea 41 y 20 las de mayor
expresión. Los antígenos recombinantes expresados en E. coli fueron reconocidos por
anticuerpos de animales infectados naturalmente, así como por anticuerpos de animales
inmunizados. Los ratones inmunizados con el gen MAP1609c generaron una respuesta
inmune de tipo Th2 (humoral) mientras que los ratones inmunizados con el gen MAP0586c
pudieron haber generado una respuesta Th1 (celular).