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dc.contributor.advisorHernández Saavedra, Norma Y.es_MX
dc.contributor.authorLópez Cuevas, Abeles_MX
dc.date.issued2013es_MX
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/365
dc.description.abstractCrassostrea gigas es una especie de gran importancia por el interés científico y por ser una de las especies marinas más cultivada en el mundo. Sin embargo, el cultivo de estos organismos no está exento de problemas ya que las mortalidades en los estadios tempranos de desarrollo, son recurrentes. Romero-Geraldo (2010) y García-Lagunas, (2011), expusieron a juveniles de 3 mm de C. gigas a los dinoflagelados Prorocentrum lima y Gymnodinium catenatum productores de toxinas DSP y PSP respectivamente, obteniendo un perfil de expresión genética en distintos grupos de genes relacionados con diferentes rutas metabólicas de C. gigas. Estas especies están reportadas como formadores de Florecimientos Algales Nocivos (FAN) las cuales han coincidido con episodios de elevada mortandad en cultivos de C. gigas. Con base a lo anterior, en el presente trabajo se realizó un estudio sobre el efecto ocasionado por la exposición de juveniles de C. gigas a una combinación de los dinoflagelados G. catenatum y P. lima con el propósito de conocer la tasa de expresión de genes relacionados con proteínas de estrés de C. gigas (CuZnSOD, GS, GST, HSP70) y regulación de ácidos nucleicos (P55). En los bioensayos de exposición en condiciones controladas de laboratorio se probaron tres tratamientos con diferentes combinaciones de P. lima + G. catenatum, empleando Isochrysis galbana como alimento para el grupo control y dos protocolos de exposición: durante 24 h (aguda) y durante 10 días, (subcrónica). Se evaluó el comportamiento en la filtración mediante conteo directo en microscopio y se observó la respuesta de C. gigas ante la presencia de los dinoflagelados mediante microscopio estereoscopio. Se extrajo ARN total para sintetizar ADNc utilizado como templado en las amplificaciones de PCR para el análisis de expresión. Los resultados muestran que C. gigas filtró totalmente a G. catenatum a las 12 horas de exposición en los tres tratamientos, mientras que la filtración del dinoflagelado P. lima fue disminuyendo y no fue consumido en su totalidad por el ostión, este comportamiento se observó durante todo el bioensayo además se apreció la formación de pseudoheces sólo para esta especie, reflejándose principalmente en los tratamientos con mayor densidad celular de P. lima. Los juveniles de C. gigas no exhibieron aparentemente respuestas fisiológicas severas ni mortandad. En el análisis de los amplicones por PCR punto final, la expresión génica se reflejó principalmente en la exposición aguda con puntos críticos de mayor o menor modulación a las 6 y 12 h, alcanzando a las 72 h el comportamiento de la expresión génica observada en el grupo control, lo cual reflejó la capacidad de adaptación del sistema antioxidante de C. gigas ante el estrés. Se observó que para GS, GST y P55 las diferencias significativas se reflejaron principalmente en T2 y T3 los cuales presentaron las condiciones experimentales de mayor concentración de P. lima (1500 y 3000 cel mL-1) presentando semejanzas entre sí en el efecto de la expresión génica de estos genes, los resultados señalan un comportamiento similar al efecto de P. lima en los estudios previos de exposición individualizada a esta especie, sugiriendo con esto, que este dinoflagelado representa un mayor riesgo tóxico para C. gigas. En el contraste del efecto de la exposición combinada de dinoflagelados tóxicos G. catenatum y P. lima con los estudios previos de exposición individualizada del grupo de genética molecular se obtuvo para SOD una respuesta sinérgica, mientras que para el resto de genes analizados el comportamiento global observado fue antagónico. Un análisis de expresión cuantitativa en PCR de tiempo real se realizó para confirmar el comportamiento observado en el análisis semicuantitativo de expresión génica.es_MX
dc.language.isoeses_MX
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.titleEfecto de la exposición de juveniles del ostión japonés Crassostrea gigas (Thunberg, 1793) a dinoflagelados tóxicos productores de toxinas dsp y pspes_MX
dc.documento.idcibnor.2013.lopez_aes_MX
dc.documento.indicelopez_aes_MX
dc.documento.instcibnores_MX
dc.dirtesis.gradoMaestría en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturaleses_MX
dc.dirtesis.disciplinaBiotecnologíaes_MX
dc.dirtesis.universidadCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.dirtesis.facultadPosgrado en Recursos Naturaleses_MX
dc.documento.fechaMarzo, 2013es_MX
dc.description.abstractenCrassostrea gigas is a bivalve mollusk of great importance for its scientific interest and for being one of the most cultured marine species in the world. However, its culture is not problem-free since mortalities in early development stages are recurrent. Romero-Geraldo (2010) and García-Lagunas, (2011) exposed 3-mm C. gigas juveniles to the dinoflagellates Prorocentrum lima and Gymnodinium catenatum, DSP and PSP toxin producers respectively, obtaining a gene expression profile in different gene groups related to diverse metabolic pathways of C. gigas. These species are reported as producers of harmful algal blooms (HABs), which have coincided with high mortality episodes in C. gigas cultures. Based on the above, in this work we studied the effect caused by exposing juvenile C. gigas to a combination of dinoflagellates G. catenatum and P. lima in order to know the rate of gene expressions related to C. gigas’ stress proteins (CuZnSOD, GS, GST, HSP70) and regulation of nucleic acids (P55). In the exposure bioassays under laboratory controlled conditions three treatments with different combinations of P. lima + G.catenatum were tested, using Isochrysis galbana as food for the control group and two exposure protocols: 24 h (acute) and 10 days (subchronic). Filtration behavior was assessed by direct counting in the microscope, and C. gigas’ response in the presence of microscopic dinoflagellates was observed in the stereoscope. Total RNA was extracted to synthesize cDNA, used as template in PCR amplifications for expression analysis. The results showed that C. gigas completely filtered G. catenatum at 12 hours of exposure in the three treatments, while filtering of the dinoflagellate P. lima was declining and it was not completely consumed by the oyster; this behavior was observed throughout all the bioassay. Likewise, formation of pseudofaeces was appreciated only for this species, mainly reflected in treatments with higher cell density of P. lima. C. gigas juveniles apparently did not show severe physiological responses or mortality. In the analysis of amplicons by PCR endpoint, gene expression was mainly reflected in acute exposure with critical points of higher or lower modulation at 6 and 12 h, reaching the behavior of the gene expression observed in the control group at 72 h, reflecting the resilience of C. gigas’ antioxidant system to stress. Significant differences were observed for GS, GST, and P55 mainly in T2 and T3 that had experimental conditions of higher concentration of P. lima (1500 and 3000 cells mL-1) showing similarities between them in gene expression effect; the results showed similar behavior to the effect of P. lima obtained in previous studies of individual exposure to this species, suggesting that this dinoflagellate represents a higher toxic risk to C. gigas than G. cantenatum. Contrasting the effect of the combined exposure to the toxic dinoflagellates G. catenatum and P. lima with previous studies of individual exposure of the molecular genetics group, a synergistic response was observed in SOD, while an antagonistic behavior was observed for the rest of the analyzed genes. A quantitative expression analysis by real-time PCR was performed to confirm the observed behavior in the semiquantitative gene expression analysis.es_MX
dc.documento.subjectCrassostrea gigas; Prorocentrum lima; Gymnodinium catenatum; PSP; DSP; FAN; exposición combinada; RT-PCR; qPCRes_MX


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