Efecto de la exposición de juveniles del ostión japonés Crassostrea gigas (Thunberg, 1793) a dinoflagelados tóxicos productores de toxinas dsp y psp

Abstract

Crassostrea gigas es una especie de gran importancia por el interés científico y por ser una de las especies marinas más cultivada en el mundo. Sin embargo, el cultivo de estos organismos no está exento de problemas ya que las mortalidades en los estadios tempranos de desarrollo, son recurrentes. Romero-Geraldo (2010) y García-Lagunas, (2011), expusieron a juveniles de 3 mm de C. gigas a los dinoflagelados Prorocentrum lima y Gymnodinium catenatum productores de toxinas DSP y PSP respectivamente, obteniendo un perfil de expresión genética en distintos grupos de genes relacionados con diferentes rutas metabólicas de C. gigas. Estas especies están reportadas como formadores de Florecimientos Algales Nocivos (FAN) las cuales han coincidido con episodios de elevada mortandad en cultivos de C. gigas. Con base a lo anterior, en el presente trabajo se realizó un estudio sobre el efecto ocasionado por la exposición de juveniles de C. gigas a una combinación de los dinoflagelados G. catenatum y P. lima con el propósito de conocer la tasa de expresión de genes relacionados con proteínas de estrés de C. gigas (CuZnSOD, GS, GST, HSP70) y regulación de ácidos nucleicos (P55). En los bioensayos de exposición en condiciones controladas de laboratorio se probaron tres tratamientos con diferentes combinaciones de P. lima + G. catenatum, empleando Isochrysis galbana como alimento para el grupo control y dos protocolos de exposición: durante 24 h (aguda) y durante 10 días, (subcrónica). Se evaluó el comportamiento en la filtración mediante conteo directo en microscopio y se observó la respuesta de C. gigas ante la presencia de los dinoflagelados mediante microscopio estereoscopio. Se extrajo ARN total para sintetizar ADNc utilizado como templado en las amplificaciones de PCR para el análisis de expresión. Los resultados muestran que C. gigas filtró totalmente a G. catenatum a las 12 horas de exposición en los tres tratamientos, mientras que la filtración del dinoflagelado P. lima fue disminuyendo y no fue consumido en su totalidad por el ostión, este comportamiento se observó durante todo el bioensayo además se apreció la formación de pseudoheces sólo para esta especie, reflejándose principalmente en los tratamientos con mayor densidad celular de P. lima. Los juveniles de C. gigas no exhibieron aparentemente respuestas fisiológicas severas ni mortandad. En el análisis de los amplicones por PCR punto final, la expresión génica se reflejó principalmente en la exposición aguda con puntos críticos de mayor o menor modulación a las 6 y 12 h, alcanzando a las 72 h el comportamiento de la expresión génica observada en el grupo control, lo cual reflejó la capacidad de adaptación del sistema antioxidante de C. gigas ante el estrés. Se observó que para GS, GST y P55 las diferencias significativas se reflejaron principalmente en T2 y T3 los cuales presentaron las condiciones experimentales de mayor concentración de P. lima (1500 y 3000 cel mL-1) presentando semejanzas entre sí en el efecto de la expresión génica de estos genes, los resultados señalan un comportamiento similar al efecto de P. lima en los estudios previos de exposición individualizada a esta especie, sugiriendo con esto, que este dinoflagelado representa un mayor riesgo tóxico para C. gigas. En el contraste del efecto de la exposición combinada de dinoflagelados tóxicos G. catenatum y P. lima con los estudios previos de exposición individualizada del grupo de genética molecular se obtuvo para SOD una respuesta sinérgica, mientras que para el resto de genes analizados el comportamiento global observado fue antagónico. Un análisis de expresión cuantitativa en PCR de tiempo real se realizó para confirmar el comportamiento observado en el análisis semicuantitativo de expresión génica.