PRODUCCIÓN DE LAS TOXINAS RECOMBINANTES PIR A Y PIR B DE Vibrio parahaemolyticus EN Escherichia coli COMO SISTEMA HETERÓLOGO

Abstract

"La Enfermedad de Necrosis Hepatopancreática Aguda (AHPND por sus siglas en inglés) representa una de las principales problemáticas en la acuicultura del camarón, causando altas mortalidades y pérdidas económicas significativas. Esta enfermedad es provocada por cepas de Vibrio parahaemolyticus que portan el plásmido pVA1, el cual codifica las toxinas PirA y PirB, responsables del daño en el hepatopáncreas. Debido a las limitaciones asociadas al manejo de cepas patógenas, la expresión heteróloga en Escherichia coli constituye una alternativa segura para su estudio. El objetivo del presente estudio es producir de manera recombinante las toxinas PirA y PirB de V. parahaemolyticus utilizando E. coli como sistema de expresión heterólogo. En este trabajo se logró la expresión de las toxinas recombinantes Pir AVP y Pir BVP en E. coli BL21 mediante los vectores pCOLDI y pET28a. Las construcciones genéticas se confirmaron mediante la purificación del ADN plasmídico y la electroforesis en gel de agarosa. La expresión proteica se indujo con IPTG y se evaluó mediante SDS-PAGE, donde se observó una mayor acumulación en la fracción insoluble, lo que sugiere la formación de cuerpos de inclusión. La identidad de las proteínas se confirmó mediante Western blot con anticuerpos anti-His-Tag. Finalmente, las proteínas se purificaron mediante cromatografía de afinidad con Ni-sefarosa. Los resultados demuestran que el sistema de expresión empleado es adecuado para la producción de las toxinas Pir AVP y Pir BVP, lo que constituye una fuente confiable para estudios posteriores sobre su estructura, función y aplicaciones en el estudio, diagnóstico y control de AHPND."