Clonación y caracterización parcial de la región génica que codifica para la proteína enlazante de sulfato de heparina (hsbp) de 71.5 kda de Helicobacter pylori

Abstract

Helicobacter pylori es un importante patógeno gástrico del humano, que posee una variedad de factores de adhesión con afinidad por receptores glicosídicos de la mucosa gástrica, uniéndose a ellos como mecanismo inicial de la colonización, por lo que a éstas moléculas se les ha considerado como excelentes candidatas para la construcción de vacunas genéticas. En trabajos previos, realizados en el Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, se han identificado adhesinas de H. pylori asociadas a membrana celular, entre las que se encuentra la proteína de 71.5 kDa. La clonación de la secuencia parcial que codifica la proteína de 71.5 kDa que reconoce sulfato de heparina (HSBP71.5), se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), usando como templado ADN genómico y oligos diseñados a partir de la secuencia de aminoácidos de péptidos internos generados mediante digestión parcial con tripsina, a partir de la proteína pura. Los productos de PCR fueron ligados al vector de clonación pGemT-easy, con el que se transformó Escherichia coli DH5mediante shock térmico. El ADN plasmídico se obtuvo por el método de lisis alcalina. La titulación y el tamizado de la librería genómica se llevó a cabo utilizando como sonda la secuencia clonada. De la secuenciación de clonas positivas se obtuvieron dos secuencias parciales de 741 y 774 pb respectivamente. La primera secuencia mostró similitud parcial del 37% con proteínas que reconocen a penicilina (PBPs), mientras que la segunda presentó una homología del 36% con proteínas que corresponden a una subunidad de proteasa clp dependiente de ATP. El análisis de proteínas realizado sobre el genoma de H. pylori en las cepas 26695 y J99 del Gen Bank, reveló que el gen hsbp71.5 puede situarse alrededor de los genes que codifican la PBPs y clp-proteasa, por lo que en estudios futuros se diseñarán primers para amplificar la secuencia completa del gen.