Desarrollo de una metodología de edición genómica basada en la entrega in ovo de Cas9 en Penaeus vannamei

Abstract

"Penaeus vannamei, conocido como camarón blanco, es la especie de camarón más producida a nivel mundial para el consumo humano. Debido a su importancia económica y por lo tanto social, continuamente se desarrollan líneas de investigación que puedan tener un impacto positivo en la producción de esta especie. Recientemente, el sistema CRISPR/Cas9, una herramienta de edición genómica de vanguardia, en conjunto con la tecnología de transducción ovárica mediada por receptor (ReMOT), han demostrado ser una estrategia exitosa para generar variantes alélicas en insectos. En este estudio se evaluó la actividad endonucleasa in vitro de la proteína Cas9-PvVg. Así mismo, con la finalidad de evaluar su internalización hacia los ovocitos, se realizaron ensayos en hembras vitelogénicas de P. vannamei, inyectando intramuscularmente una mezcla de la proteína con cloroquina, la cual es un agente disruptor endosomal. Evaluaciones inmunohistológicas en muestras de tejido gonadal 12 h post-inyección, evidenciaron que la proteína Cas9-PvVg es capaz de internalizarse en los ovocitos, incluso translocarse al núcleo. Aunque estudios moleculares posteriores son necesarios para confirmar estos resultados, la técnica CRISPR/Cas9-ReMOT desarrollada en este estudio muestra ser una herramienta prometedora para ser empleada en aproximaciones de edición genómica en P. vannamei y potencialmente en crustáceos."