Identificación molecular de larvas de moluscos gasterópodos mediante el gen 18S ARNr
Resumen
Muchas especies marinas poseen un estadio larvario pelágico que es morfológicamente distinto y mucho más chico que la forma adulta. Entre ellos resaltan los moluscos gasterópodos por su importancia económica como fuente de alimento, ornamentales y de compuestos farmacéuticos. Entender los procesos que afectan tanto a la supervivencia como el transporte de éste estadio y su influencia en la distribución espacial, dinámica poblacional, estrategias de migración y evolución de las especies, representa uno de los retos principales en Ecología Marina. Los estudios de dinámica larvaria son importantes como insumo para el manejo pesquero y diseño de prácticas acuícolas. Sin embargo, estos estudios enfrentan el enorme reto de la identificación precisa de especies, por lo que en el presente trabajo se explora la factibilidad de incorporar herramientas moleculares como alternativa a la identificación morfométrica tradicional. Se evaluaron cuatro herramientas moleculares basadas en la amplificación por PCR del gen 18S ARNr. El uso potencial de sondas moleculares tipo “Molecular Beacon” (1), el análisis de fragmentos de restricción (RFLPs) (2) y el análisis de Disociación de Alta Resolución (HRM) (3) fueron dirigidos a la identificación de especies de gasterópodos de elevada importancia comercial (abulones); en tanto que el análisis total de polimorfismos a partir de secuencias parciales (4) se dirigió a la caracterización de larvas de moluscos gasterópodos de muestras de plancton obtenidas de dos localidades de la costa occidental del Estado de Baja California Sur (La Bocana y Cabo Tosco), comparando sus secuencias con la base de datos de ADN GenBank. La sonda tipo Molecular Beacon presentó señales diferenciales entre muestras de ejemplares adultos de Haliotis sp. y Megastraea sp., en tanto que el análisis HRM mostró curvas de disociación distintivas entre los géneros Haliotis, Fissurella y Megathura. El análisis de RFLPs en ejemplares adultos de Haliotis corrugata, Fissurella volcano, Megathura crenulata, Tegula eisenii y Megastraea undosa, basados en la digestión con la enzima DdeI mostró también una clara diferencia en los tamaños de fragmentos obtenidos y por ende de dichas especies. Sin embargo, el análisis de larvas requirió además de la digestión con la endonucleasa Sau3AI, para la diferenciación de haliótidos de otros moluscos gasterópodos presentes en las muestras. Se discute el potencial de las tres estrategias como herramientas de identificación de haliótidos y otros géneros de importancia comercial, particularmente en estadio larvario. De las muestras del plancton se analizaron las secuencias de 318 larvas resultando en 154 genotipos correspondientes a 15 órdenes de moluscos gasterópodos con 36 familias y 40 géneros. Sobresalen caracoles litorinimorfos (Littorinimorpha), babosas de mar del orden Sacoglossa y caracoles neogasterópodos (Neogastropoda). Se discute la factibilidad del uso del gen 18S ARNr en la identificación a nivel de especie. En La Bocana, en la estación de superficie LB01 se estimaron 55 genotipos, en la estación de superficie LB07 21 genotipos y en la de fondo LB10 52 genotipos; para la estación CT01 (superficie) de la localidad de Cabo Tosco se estimaron 47 genotipos. La mayor diversidad de genotipos se registró en La Bocana en las estaciones de superficie y fondo (LB01 y LB10), las cuales compartieron casi la totalidad de los órdenes identificados. Entre las localidades de La Bocana y Cabo Tosco también se encontró similitud en los órdenes presentes, pero ésta fue menor que la observada entre las estaciones de la localidad de La Bocana (LB01, LB07 y LB10). En una primera aproximación, los resultados obtenidos de la utilización del análisis de secuencias permitieron la obtención de relaciones filogenéticas y su comparación entre las estaciones en estudio. Se discute la importancia del incremento del tamaño de muestra para futuras aplicaciones del análisis de secuencias aplicado a estudios ecológicos en larvas de moluscos gasterópodos.