Identificación y secuencia parcial de un peptido presente en la glandula sinusal de Penaeus vannamei (Bonne 1931), reconocido por sueros hiperinmunes diseñados a partir de la hormona inhibidora de las gónadas de crustáceos

Abstract

Partiendo de tres mil organismos juveniles de Penaeus vannamei se obtuvieron seis mil tallos oculares. De ellos se extrajeron por microdisección cuatro mil glándulas sinusales que fueron homogeneizadas y procesadas para obtener su extracto soluble. El extracto fue purificado mediante cromatografía líquida de alta presión en fase reversa, donde se obtuvieron 22 fracciones, las trece fracciones iniciales corresponden a componentes con baja cantidad de proteína y las últimas nueve muestran como componentes principales moléculas de naturaleza peptídica. Las fracciones peptídicas se encuentran parcialmente purificadas al presentar diversos componentes cuando se corrieron en electroforesis desnaturalizante en PAGE-SDS TRIS-tricina.

Simultáneamente, basándose en la secuencia de un par de segmentos de la hormona inhibidora de las gónadas (GIH) de Metapenaeus ensis se diseñaron y elaboraron dos péptidos sintéticos, con 18 y 19 residuos de aminoácidos de longitud respectivamente. Estos péptidos fueron usados para inmunizar y obtener sueros policlonales hiperinmunes en ratón y conejo. Después de la segunda inmunización los sueros mostraron anticuerpos específicos contra los antígenos inductores de la respuesta inmune, los cuales presentan reacción cruzada el extracto completo de la glándula sinusal de P. vannamei.

En la fracción F18, resultante de la purificación por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa, mediante técnicas inmunoquímicas (ELISA y Western blot) se detectó un péptido reactivo con los sueros hiperinmunes inducidos usando los péptidos sintéticos, el cual migra electroforéticamente entre las bandas de 14200 y 6500 Da y muestra una masa molecular cercana a los 10000 Da.

La secuencia obtenida por degradación de Edman en un secuenciador de aminoácidos automatizado permite identificar seis residuos de aminoácidos correspondientes al segmento aminoterminal de dicho péptido. La secuencia reportada se ordena en la siguiente manera: ser-gly-asp-gly-glu-gly. Aparentemente la secuencia obtenida se encuentra contaminada a juzgar por la elevada cantidad de glicinias encontradas y por presentar baja identidad con los péptidos sintéticos. El escaso número de residuos impide realizar comparaciones en los bancos de datos bioinformáticos.