Caracterización del DNAc de la hormona de crecimiento de Lutjanus peru y su producción en Chlorella sorokiniana y Pichia pastoris

Abstract

"El huachinango (Lutjanus peru), es un pez con gran potencial comercial que habita desde las costas del sur de California hasta el norte de Perú, su cultivo se ha ido intensificando a medida que se ha cerrado su ciclo de cultivo en cautiverio observando que obtiene su madurez sexual a los 3 años. Para la obtención de cultivos de mayor peso y talla se ha utilizado la aplicación de hormona de crecimiento (GH del inglés de Growth Hormone) recombinante, lo que ha llevado al desarrollo de patentes con un gran potencial comercial. Para la producción de GH se utilizan sistemas de producción entre los que destaca E. coli por su facilidad de manipulación, el conocimiento de su genoma y los costos de producción. Sin embargo presenta desventajas a la hora de realizar modificaciones post-traduccionales, esenciales para la actividad biológica de las GH. Por otra parte, organismos como P. pastoris y C. sorokiniana representan una alternativa viable para la producción de GH recombinantes, entre otros metabolitos de interés industrial, pues ya se ha probado que tienen la capacidad de producir hormonas de crecimiento de mamíferos (humano, perro, gato, caballo, cerdo, entre otros) y de peces con actividad biológica. Es por ello que el objetivo de este trabajo fue el de caracterizar el DNAc de la hormona de crecimiento de L. peru (LpGH) y producirlo empleando Pichia pastoris y Chlorella sorokiniana como sistemas para la obtención de proteínas recombinantes. A partir de RNA total de pituitaria de L. peru, se aisló un DNAc de 1025 pb que codifica para una proteína de 203 aa, 23 KDa y punto isoeléctrico de 6.89, el gen se obtuvo de gDNA y consta de 2 Kb de regiones intrón. La región codificante de la proteína madura se insertó en el vector de clonación pMDC32 para la transformación por balística de C. sorokiniana y pPIC9 para la transformación de P. pastoris. Se comprobó mediante pruebas moleculares (PCR) la transformación genética de ambos sistemas y se evaluó la producción de la proteína recombinante en geles de poliacrilamida al 12% teñido con azul de coomassie y la detección de la misma por western blot. Por lo que este trabajo sienta las bases para una aplicación de la LpGH para determinar el efecto de la misma para propósitos prácticos."