Diseño y fabricación de un arreglo molecular de ADN para la identificación de regiones promotoras y terminadoras utilizadas en la construcción de organismos genéticamente modificados

Abstract

"Desde que los primeros cultivos de soya y canola resistentes a herbicidas fueron cultivados comercialmente en 1996, los cultivos de Organismos Genéticamente Modificados (OGM’s) se han expandido a aproximadamente 175.2 millones de hectáreas en 27 países, por lo que muchos países y federaciones han implementado sistemas de seguridad y vigilancia. Sin embargo, aunque la complejidad y la variabilidad de los OGM’s se encuentran en aumento, con frecuencia su detección se enfoca en la búsqueda de un limitado número de elementos genéticos. En particular, las herramientas para su detección se basan en la búsqueda del promotor CaMV35s (derivado del virus del mosaico de la coliflor) o la combinación de CaMV35s y el terminador Nos (del gen de la Nopalina Sintetasa de la bacteria Agrobacterium tumefaciens). No obstante, el 38% de los transgénicos no son detectados con solo una prueba para CaMV35s, y la combinación de CaMV35s y Nos disminuye esta tasa de falsos negativos a un 28%. Además, estas herramientas tienen la desventaja de ser funcionales en la medida que se conozca el gen introducido como transgen y que se utilicen las construcciones habituales. Por lo cual, se desarrolló una técnica eficaz que permite identificar un mayor número de elementos transgénicos en un cultivo o producto, sin la necesidad de conocer previamente el origen del transgen. El objetivo general de este trabajo fue: diseñar y fabricar un arreglo molecular para la identificación de regiones promotoras y terminadoras comúnmente utilizadas en la construcción de organismos genéticamente modificados. El diseño de sondas a partir de secuencias derivadas de un análisis bioinformático de las regiones promotoras y terminadoras de los genomas existentes en las bases de datos, de construcciones comerciales de vectores de expresión y de construcciones experimentales, permitió el diseño de un arreglo molecular de ADN con 45 sondas capaces de identificar la presencia de elementos transgénicos. Un total de 33 sondas resultaron efectivas en la hibridación de los microarreglos acoplado a la técnica de PCR multiplex, permitiendo una aproximación rápida para la detección simultánea de elementos transgénicos en productos frescos y procesados. Así, mediante ésta herramienta se identificaron 4 granos y 2 harinas tomadas de comercios locales, que contienen elementos transgénicos (7s, P-SAMS, tahsp17) y se identificaron elementos transgénicos “no declarados” en algunas de las construcciones de patente. Por lo tanto, el diseño del arreglo molecular de ADN para la identificación de transgénicos presenta la ventaja de poder incorporar eventualmente sondas que permitan mantenerlo actualizado para la identificación de nuevas variedades transgénicas apoyando el desarrollo de técnicas para el monitoreo y control de transgénicos."