DISEÑO Y DESARROLLO DE UN PROTOTIPO DE NANOVACUNA ORAL BASADA EN AuNPs Y EL PÉPTIDO DE LptD
Resumen
"La vacunología se apoya en ciencias emergentes, como la nanotecnología, para el desarrollo de vacunas innovadoras y eficaces dirigidas a la prevención de enfermedades. El estudio de la materia a nivel nanométrico ha permitido emplear nanopartículas con gran éxito en biomedicina, como el caso de las nanopartículas de oro (AuNPs). Sus excelentes propiedades físicas, químicas y biológicas, que son intrínsecas a su tamaño nanométrico, las convierten en potenciales candidatos para su uso como acarreadores de antígenos en la formulación de nanovacunas. Por otra parte, son miles los pacientes reportados cada año con enfermedades causadas por bacterias Gram negativas como Vibrio parahaemolyticus. Este patógeno posee una proteína en su membrana externa llamada LptD, y dentro de ésta se encuentra un péptido que fue inmunogénico e inmunoprotector contra esta bacteria en modelo animal. Por lo anterior, este trabajo tuvo como objetivo sintetizar AuNPs control (cis@AuNP) y AuNPs bioconjugadas con el péptido de LptD (LptD@AuNP) empleando dos métodos de síntesis: El Método I que consistió en la reducción de sales de oro empleando cisteína como agente estabilizador (cis@AuNP); y el Método II, realizando la reducción, estabilización del oro y la bioconjugación de las AuNPs con el péptido de LptD (LptD@AuNP) de manera simultánea, gracias a la afinidad reductora que algunos aminoácidos de la estructura peptídica presentan por metales como el oro. Ambos sistemas se sometieron a una caracterización fisicoquímica mediante las técnicas de Abs UV-Vis, DLS, SEM, HRTEM, XPS y FTIR. Las AuNPs de las soluciones cis@AuNPs presentaron forma esférica y buena distribución de tamaño cuya energía superficial positiva era inducida por los grupos amino de la cisteína e influenciada por el pH de la solución. Las AuNPs de las soluciones LptD@AuNPs fueron esféricas, estables y se comprobó la presencia del péptido de LptD anclado a sus superficies. Finalmente, las AuNPs obtenidas de ambos métodos no fueron citotóxicas a las concentraciones evaluadas en células de bazo de ratón. En conclusión, se desarrolló un prototipo de nanovacuna basada en nanopartículas de oro y aminoácidos reductores de un péptido inmunogénico de V. parahaemolyticus que demostraron ser estables y bioseguras en células de bazo de ratón. Como perspectiva se espera elucidar mecanismos involucrados en la respuesta inmune de las mucosas, valorar el potencial inmunoprotector contra la gastroenteritis y determinar el posible uso de estos sistemas como nanovacunas orales."