Actividad y expresión de aspártico proteasas en el desarrollo larvario del camarón blanco Litopenaeus vannamei

Abstract

"El camarón blanco (Litopenaeus vannamei), es un crustáceo que durante su desarrollo larval pasa a través de cambios morfológicos, ecológicos y fisiológicos que se encuentran asociados con la maduración de la capacidad motora y metabólica. En otros artrópodos, se ha identificado que la actividad enzimática presenta variaciones relacionadas con los eventos de metamorfosis. Las enzimas sobre la cuales se centra esta investigación son las proteasas, que regulan procesos celulares importantes y mantienen la homeostasis celular. En particular, esta investigación se enfoca en la descripción del perfil de actividad y expresión genética de las aspártico proteasas, β-secretasa y catepsina D, en el desarrollo ontogénico de L. vannamei. Se obtuvieron muestras de 18 estadios larvales a partir de las cuales se extrajeron las proteínas solubles totales y el RNA total usando técnicas estándar. La actividad proteolítica se cuantificó usando sustratos fluorogénicos específicos para aspártico proteasas, la cual fue verificada con ensayos en presencia del inhibidor Pepstatin-A, específico para estas enzimas. Los estadios nauplio presentaron la mayor actividad de catepsina D, mientras que para β-secretasa un pico de actividad se detectó en el estadio nauplio 3. Los resultados de la cuantificación de los transcritos de catepsina D mostraron que el transcrito se encuentra en todos los estadios con una mayor expresión en los estadios nauplio 5, mysis 2 y 3, por otro lado, β-secretasa se expresa en mucho menor cantidad pero de manera constante, a lo largo del desarrollo larvario solo se detectó diferencia significativa en el estadio postlarva 11. Para tratar de determinar la relevancia de estas enzimas en el desarrollo larval, se utilizó RNAi para silenciar los transcritos de interés, 15 μg/mL de dsRNA de cada transcrito fue suministrado directamente al agua donde fueron mantenidas las larvas, el efecto del RNAi se evaluó mediante observación directa de cambios en la morfología y comportamiento de las larvas y por qPCR. Los especímenes no mostraron diferencias en la sobrevivencia ni en el comportamiento, las cuantificaciones de los transcritos correspondientes a los tratamientos no mostraron diferencias significativas con los controles, indicando que el método de sumersión no entrega de manera efectiva el dsRNA..."