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dc.contributor.advisorBashan, Yoaves_MX
dc.contributor.advisorBacilio Jiménez, Macarioes_MX
dc.contributor.authorRomero López, Blanca Estelaes_MX
dc.date.issued2009es_MX
dc.identifierhttps://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/324
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/259
dc.description.abstractEntre las relaciones asociativas de plantas y microorganismos el endofitismo representa una interacción sinergista con beneficio para ambos organismos. En la actualidad se presume la presencia ubicua en los vegetales superiores de las bacterias endófitas y se van encontrando evidencias de la participación de estos microorganismos en procesos que se creía eran llevados a cabo exclusivamente por las plantas. Se hipotetizó que las bacterias endófitas pueden representar un papel importante en el establecimiento de plantas en rocas a través de la promoción del crecimiento vegetal y la intemperización de rocas. El presente estudio abordó desde enfoques de ecología vegetal, microbiología y fisiología vegetal, la importancia de algunas especies colonizadoras de rocas, el aislamiento, la identificación y caracterización parcial de la microflora endofítica así como el efecto de su inoculación en la fisiología de Mammillaria fraileana, endémica de la Península de Baja California. El estudio ecológico de la abundancia de especies saxícolas resaltó la importancia de M. fraileana como colonizadora de rocas e indicó que las variaciones locales de su abundancia se asociaron con el tipo de roca, proporción de minerales, susceptibilidad a la intemperización y proporción de elementos en las rocas. Sitios con baja abundancia de plantas fueron caracterizados por la presencia de brecha volcánica ricas en Ca, Fe, Mg, Ti, Al y Mn, contenidos en minerales moderadamente intemperizables como plagioclasa y piroxenos. Sitios con alta abundancia de plantas presentaron roca tipo riodacitas-andesitas ricas en minerales más fácilmente intemperizables y elementos como Si, K y Na. Se sugiere que la interacción entre elementos, más que el efecto aislado de alguno de ellos puede ser la explicación más viable para explicar variaciones locales de la abundancia de M. fraileana. En el enfoque microbiológico se confirmó la presencia de bacterias endófitas de M. fraileana a través de métodos cultivo-dependientes y cultivo-independientes. Se probaron diversos esquemas de desinfección y medios de cultivo sin obtener bacterias cultivables en semillas, frutos y plántulas. Sin embargo, utilizando técnicas cultivo-independientes como amplificación del gen 16S rDNA, hibridación fluorescente in situ (FISH) y tinción de bacterias viables (FDA) se confirmó la presencia de bacterias endófitas en semillas. Las evidencias cualitativas por microscopía electrónica de barrido también indicaron la presencia de bacterias en el interior de semillas. También se detectaron bacterias endófitas cultivables en tallo y raíz. De raíz se aislaron 14 morfotipos bacterianos, identificándose por secuenciación total del gen 16S rRNA a las cepas Azotobacter vinelandii M2Per, Bacillus megaterium M1PCa, Pseudomonas putida M5TSA y Enterobacter sakazakii M2PFe. En pruebas in vitro se observó que A. vinelandii M2Per fue la única cepa fijadora de nitrógeno. La capacidad para solubilizar fosfatos inorgánicos fue comprobada para P. putida M5TSA, E. sakazakii M2PFe y B. megaterium M1PCa mientras que A.vinelandii M2Per P. putida M5TSA y B. megaterium M2PCa degradaron rocas riodacitas a través de la reducción del tamaño de las partículas de rocas y cambios notables en el pH del medio. A los 3.5 meses de la inoculación con bacterias endófitas de raíz en plántulas de M. fraileana se observaron colonización y establecimiento exitosos a nivel intracelular del tejido vegetal. La inmunolocalización fluorescente y microscopía electrónica de barrido indicaron que la mayor densidad bacteriana ocurre en la raíz y disminuye en sentido acropétalo. Se demostró que la intemperización de rocas puede acelerarse a través del aumento en la movilización de elementos minerales hacia plantas inoculadas con bacterias endófitas. Las cepas más eficientes en la movilización de elementos fueron B. megaterium, P. putida y E. sakazakii. El aumento en la movilización de elementos minerales bajo la acción de las bacterias endófitas no produjo, en apariencia, algún efecto por toxicidad en las plantas. En las interacciones entre inóculos iii y variantes de sustrato se observaron diversas combinaciones de elementos en proporciones variables, sugiriendo que la movilización es un proceso complejo que, entre otros factores, depende de la composición química de las rocas, la proporción relativa y la disponibilidad de los elementos minerales. Los patrones de movilización de elementos mostraron un grado de asociación con la abundancia de M. fraileana colonizando rocas, siendo el Na y P notablemente más movilizados de las rocas donde M. fraileana crece en abundancia, mientras que el Fe fue mayormente movilizado de las rocas con muy baja abundancia. Dada la amplia gama de respuestas que presentan las cactáceas ante diferentes condiciones de nutrientes en el sustrato se recomiendan estudios específicos para definir la función de cationes como el Si, Na y para explicar la tolerancia de las cactáceas a elementos como el Cu y Zn que resultan tóxicos para otras plantas. El crecimiento de las plantas crecidas en sustrato rocoso fue intensificado por la inoculación con bacterias endófitas. La inoculación con E. sakazakii M2PFe produjo mayor biomasa seca en las plantas mientras que la inoculación con P. putida M5TSA incrementó significativamente el nitrógeno total en las plantas. Por otro lado P. putida y A. vinelandii M2Per incrementaron la actividad fotosintética vía metabolismo ácido crasuláceo (CAM). Se propone que el metabolismo CAM puede participar activamente en la disolución de minerales mediante la producción y liberación de ácidos orgánicos como el malato.es_MX
dc.language.isoeses_MX
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.titleEstudio de la colonización de rocas por Mammillaria fraileana (Britt. y Rose) boed. [cactaceae] y evaluación de la asociación con bacterias endófitas en el crecimiento vegetal y sobre la intemperización de rocases_MX
dc.documento.idcibnor.2009.romero_bes_MX
dc.documento.indiceromero_bes_MX
dc.documento.instcibnores_MX
dc.dirtesis.gradoDoctorado en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturaleses_MX
dc.dirtesis.disciplinaEcologíaes_MX
dc.dirtesis.universidadCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.dirtesis.facultadPosgrado en Recursos Naturaleses_MX
dc.documento.fechaSeptiembre, 2009es_MX
dc.description.abstractenAmong associative interactions between plants and microorganisms, endophytism represents a synergistic interaction benefitting both organisms. Endophytic bacteria occur in most plants and evidence is accumulating that endophytes participate in processes formerly believed to be carried out exclusively by plants. It is hypothesized that endophytic bacteria play an important role in plant establishment through promoting plant growth and weathering rock. This study explored approaches in plant ecology, microbiology, and plant physiology to document the importance of rock-colonizing plants, its endophytic microflora, and the effect of inoculation with endophytic bacteria on plant physiology. We used the small cactus Mammillaria fraileana, an endemic of the Baja California Peninsula, as a model. The ecological survey of saxicolous (rock-dwelling) plants highlighted the importance of M. fraileana as a rock-colonizing plant and showed that local variations in abundance were associated with the type of bedrock, minerals, weathering characteristics, and the proportion of elements. Sites with few plants contain volcanic breccias containing high amounts of Ca, Fe, Mg, Ti, Al, and Mn in moderately weatherable minerals, such as plagioclase and pyroxene. Sites with rocks of rhyodacite, rhyolite, and andesite are rich in more weatherable minerals, such as volcanic glass and minerals containing Si, K, and Na. These results suggest that interactions of elements, rather than the isolated effect of specific elements, could be the most reliable explanation for local variations in the abundance and dominance of M. fraileana. The microbiological approach confirmed that endophytic bacteria are present in M. fraileana by using cultivation-dependent methods and cultivation-independent methods. Several techniques of disinfection and culture media were tested and no culturable bacteria were isolated from seeds, fruits, and seedlings. The occurrence of endophytic non-culturable bacteria in seeds was demonstrated by amplification of 16S rDNA, fluorescent in situ hybridization (FISH), and vital fluorescent staining (FDA). Evidence from electron scanning microscopy (SEM) also indicated natural occurrence of endophytic bacteria in seeds. Culturable endophytic bacteria were detected in stems and roots. Among 14 strains isolated from roots, Azotobacter vinelandii M2Per, Bacillus megaterium M1PCa, Pseudomonas putida M5TSA, and Enterobacter sakazakii M2PFe were identified by full sequencing of 16S rRNA. In vitro tests showed that only A. vinelandii M2Per is a nitrogen fixer. Solubilization of inorganic phosphate was exhibited in P. putida M5TSA, E. sakazakii M2PFe, and B. megaterium M1PCa, while A. vinelandii M2Per, P. putida M5TSA, and B. megaterium M1PCa degraded ryodacite by reducing the size of rock particles and by extensively changing the pH of the liquid media. After 3.5 months of inoculation with endophytic bacteria of seedlings of M. fraileana, intracellular colonization and establishment was observed. Fluorescent immuno-localization and SEM showed that densities of bacterial populations decreased from the root and stem toward the apical zones. Results demonstrated that rock weathering is accelerated by increasing mobilization of elements to the plants inoculated with endophytic bacteria. The most efficient strains in mobilizing elements to plants were B. megaterium M1PCa, P. putida M5TSA, and E. sakazakii M2PFe. Increased mobilization did not seem to produce toxic effects in plants inoculated with endophytic bacteria. Among interactions between inoculants and rock substrates, there were several combinations of elements mobilized to plants at variable proportions that suggested that mobilization is a complex process that depends on chemical composition of rocks and availability of elements and their relative proportion. Patterns of element mobilization showed association to the abundance of M. fraileana in the wild. Na and P were more mobilized from rocks where low abundance of plants occurred while Fe was higher in plants grown on rock substrate with low v abundance of plants. Given the wide range of responses of cacti to different nutrient conditions of substrates, specific studies intended to define the role of cations, such as Si and Na and to explain the tolerance of cacti to elements, such as Cu and Zn, that are toxic for most plants should be preformed. Inoculation with E. sakazakii M2PFe increased the dry weight of plants, while P. putida M5TSA increased total nitrogen of plants. P. putida M5TSA and A. vinelandii M2Per enhanced photosynthetic activity through crassulacean acid metabolism (CAM). We suggest that organic acids, such as malate, produced during CAM may actively participate in dissolving minerals. Key words: Endophytic bacteria, cacti, colonization of rock, weathering of rock, plant growthpromoting bacteria (PGPB).es_MX
dc.documento.subjectBacterias endófitas; cactáceas; colonización de rocas; intemperización de rocas; bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPB)es_MX


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  • Tesis Digitales CIBNOR
    Esta colección contiene texto completo de las tesis de Maestría y Doctorado del Programa de Posgrado del CIBNOR.

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