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Caracterización enzimática de la actividad de fenoloxidasa de la hemocianina de Penaeus vannamei

dc.contributorFERNANDO LUIS GARCIA CARREÑO
dc.creatorABDIEL KENI COTA RUIZ
dc.date2007-11-30
dc.identifierhttp://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/300
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/2551
dc.descriptionLa melanosis post mortem es un problema que va en detrimento de las propiedades sensoriales de los crustáceos. El desarrollo de melanina parece depender de fenoloxidasas endógenas sintetizadas en los hemocitos, sin embargo, una proteína más abundante, la hemocianina (Hc), podría estar involucrada y ser más importante. Se investigó la actividad de fenoloxidasa (PO) de la Hc, así como también el mecanismo de conversión y propiedades catalíticas. La Hc del plasma del camarón blanco, Penaeus vannamei, fue purificada y convertida en una proteína con actividad de PO (HcPO) utilizando agentes tanto químicos como enzimáticos; el tratamiento con SDS fue el que generó una mayor conversión. Por su parte, la quimotripsina fue el activador enzimático que mayor tasa de conversión generó. Utilizando electroforesis preparativa, los agregados 6-mer y 12-mer de la Hc fueron purificados, el último agregado fue el que presentó actividad de fenoloxidasa, indicando que la actividad depende también de la forma cómo se conforman las subunidades a nivel cuaternario. La HcPO puede utilizar tanto sustratos difenólicos como monofenólicos. La HcPO presenta óptimos de temperatura (45 °C) y pH (7.6) similares a los que despliegan fenoloxidasas de artrópodos. Tiene una Km de 1.48 mM y una Vmax (x 1000) de 30.5 U/mg cuando se utiliza L-DOPA como sustrato. La Hc es estable al congelado y descongelado a –20 ºC, condiciones a las cuales se sigue observando el desarrollo de melanina. Adicionalmente, la cantidad de potenciales moléculas con actividad de fenoloxidasa derivadas de la hemocianina sugieren que esta proteína puede ser un inductor clave en melanosis post mortem.
dc.descriptionMelanosis is a major concern in prolonging the shelf life of crustaceans. This kind of discoloration appears to depend on endogenous polyphenol oxidases (PO) located in hemocytes; however, a more abundant protein, hemocyanin (Hc), may be involved. The PO activity of Hc, the mechanism of conversion and the catalytic properties were investigated. The pure Hc was converted into phenoloxidase-like enzyme (HcPO) using chemical and enzymatic treatments. The SDS treatment was the most potent converter. Additionally, chymotrypsin treatment was the major enzymatic converter of Hc. Using preparative electrophoresis, pure 6-mer and 12-mer aggregates were obtained, with the latter aggregate the only one with phenoloxidase activity. This demonstrated that the activity depends on the way how subunits are aggregated at quaternary level. This novel enzyme can use mono and diphenolic substrates to generate melanin and has a similar biochemical pattern compared with crustaceans POs. HcPO posses a Km value of 1.48 mM and a Vmax value (x 1000) of 30.5 U/mg when L-DOPA is used as substrate. Hc is stable when frozen and thawed at –20 °C, and its amount in hemolymph is three orders of magnitude higher than PO. These results suggest that this protein is key inductor of black spots in shrimp.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagespa
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/AUTOR/Actividad de fenoloxidasa (PO); mecanismo de conversión; propiedades catalíticas; hemocianina; Penaeus vannamei
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/7
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/33
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/3309
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/330913
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/330913
dc.titleCaracterización enzimática de la actividad de fenoloxidasa de la hemocianina de Penaeus vannamei
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis


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