Efecto de la levadura Debaryomyces hansenii silvestre e inhibida de su actividad ornitin-descarboxilasa sobre el desarrollo larvario de la cabrilla arenera (Paralabrax maculatofasciatus)
Abstract
El interés por el uso de probióticos en la acuacultura se ha incrementado en los últimos años, con fines de mejorar los rendimientos de los cultivos larvarios. Tal es el caso del uso de la levadura Debaryomyces hansenii, que secreta a las poliaminas putrescina (put), espermidina (spd) y espermina (sp), moléculas indispensables para el crecimiento y diferenciación celular. El objetivo de este trabajo fue evaluar la inclusión de la levadura D. hansenii silvestre e inhibida químicamente de su actividad ornitin-descarboxilasa (ODC), sobre el desarrollo del sistema digestivo larvario de la cabrilla arenera (Paralabrax maculatofasciatus), especie con potencial de cultivo y demanda comercial. Para conocer la producción de poliaminas se realizó la cinética de crecimiento de D. hansenii en condiciones normales y en presencia del inhibidor DFMO (-Difluoro-metil-ornitina) para bloquear irreversiblemente la actividad enzimática ODC y se cuantificaron por HPLC. Larvas de la cabrilla arenera fueron alimentadas a partir del día 20 después de la eclosión con diferentes dietas microparticuladas conteniendo levaduras silvestres (ODC +) equivalente a 106 UFCg-1, levaduras inhibidas en su actividad ODC (ODC -) y una dieta control sin levaduras. Durante el tiempo de administración de las dietas, se tomaron muestras cada 5 días para conocer el crecimiento, supervivencia, actividad y expresión (por RT-PCR cuantitativo mediante sondas Taqman®) de enzimas digestivas (tripsina, lipasa, amilasa y aminopeptidasa) de la larva. Los resultados obtenidos muestran que el inhibidor DFMO (2mM) no afecto el crecimiento ni la producción de poliaminas en D. hansenii (P> 0.05) por lo que suponemos que puede existir una vía alterna en la biosíntesis de estas moléculas o que la ruptura de la pared celular de las levaduras no se realizó adecuadamente. En cuanto al cultivo larvario, la supervivencia larval fue significativamente diferente con el 13.05 0.54% para ODC (+), 11.60 0.92% con ODC (-) y del 10.34 1.23% para la dieta control. La actividad de las enzimas tripsina, lipasa y aminopeptidasa presentaron los niveles mas altos en los grupos alimentados con ODC (+); en cuanto la actividad amilasa, el grupo control presentó los niveles de actividad más altos, lo que nos indica un mayor retraso en la maduración digestiva de la larva con esta dieta [...] The interest in the use of probiotics in aquaculture has increased in the last years with aims to improve the yields of the larvae cultures. In the case of the use of the Debaryomyces hansenii yeast, that secrete the polyamines putrescine (put), spermidine (spd) and spermine (sp), indispensable molecules for growth and cellular differentiation. The objective of this work was to evaluate the inclusion of wild D. hansenii yeast and those yeast inhibited of its activity ornithine-decarboxylase (ODC), on the development of the digestive system of the spotted sand bass Paralabrax maculatofasciatus larvae, fish with culture potential and commercial demand. In order to understand the polyamines production we made growth kinetic of D. hansenii in normal conditions and in the presence of the irreversibly ODC inhibitor, Difluoro-methyl-ornithine (DFMO). Polyamines yeast productions were quantify by HPLC. 20 day old spotted sand bass larvae were fed with three microparticulate diets: 1) containing wild yeast (ODC +) equivalent to 106 UFCg-1 and 2) a diet containing yeast inhibited in their ODC activity (ODC -) and 3) a microparticulated control diet without yeast. During the time of administration of the diets, every 5 days samples were taken to measure the growth, survival, activity and expression (by quantitative RT-PCR by means of Taqman® probes) of digestive enzymes of the larvae (trypsin, lipase, amylase and aminopeptidase). Our results show that the inhibitor DFMO (2mM) did not affect the growth or the production of polyamines in D. hansenii (P > 0.05). Two hypothesis should be probe 1) that an alternate route of polyamines bio synthesis exists or 2) that the yeast´s cell walls did not break adequately with our procedure. In the case of larvae culture, the larval survival was significantly different in those larvae fed ODC (+) 13.050.54% comparing with ODC (-) 11.600.92% and the control diet 10.340.54%. The activity of trypsin, lipase and aminopeptidase presented the highest levels in the groups fed with yeast ODC (+). In the case of amylase activity, the control group presented the highest levels of this enzyme, which indicates a greater delay in the maturation process with this diet [...]
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