Diversidad filogenética de arqueas halófilas extremas cultivables de Exportadora de Sal, S.A., Guerrero Negro
Abstract
Hypersaline habitats are one kind of extreme environments. These are distributed worldwide and one interesting aspect is that they existed since the Precambrian Era, they shelter specialized microbial populations that thrive under highly saline conditions, and their microbial populations are a potential source for new molecules with useful biotechnological applications. The most outstanding members are those of the archaea domain, particularily the Halobacteriacea family. The lowland that contains the Exportadora de Sal, S.A. -ESSA salt works receives intense insolation, a condition that favors long extensions of lands that are rich in minerals crystallized from evaporation of seawater (evaporites such asanhydrate , gypsum, and halite). Very few studies have been carried out on isolating and identifying halophile archaea that reside in the gypsum-anhydrate ponds and sodium chloride crystallizer ponds. This study describes and phylogenetically relates the composition of culturable halophilic archea in brine and evaporite minerals from the bottom of the ponds 9 and 10 and crystallizer ponds 19 and 20. Polyphasic analysis included: isolation of halophilic archaeal and phototrophic anoxigenic bacterial strains, phase-contrast microscopy (PCM), scanning electron microscpy (SEM), and sequencing of DNA for 16s rRNA signaling phylogenetic analysis; with the same methods, we analyzed total haloarchaeal community by a culturable, independent method that comprised amplification of DNA, environmental samples that code for a fragment of the 16s rRNA, followed by a separation of the PCR products in an denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) for subsequent statistical analysis. We obtained five strains from ponds 9 and 10, four of them belong to the genera Halobacterium, each with different colonial morphologies; one corresponds with Halogeometricum borinquense species. A Haloarcula strain was obtained from crystallizer pond 20. We believe this is the same species previously isolated by other researchers, partially studied and proposed as Haloarcula californiae [...] Los habitats hipersalinos son un ejemplo de ambiente extremo. Están distribuidos globalmente y su importancia radica en que han existido desde tiempos precámbricos, en que poseen poblaciones microbianas particularmente especializadas en prosperar bajo condiciones de alta salinidad y sus pobladores son fuente potencial de moléculas nuevas con aplicación biotecnológica. Los miembros más conspicuos son aquellos del domino Arquea, particularmente de la familia Halobacteriaceae. La planicie donde se encuentra Exportadora de Sal, S.A. (ESSA), Guerrero Negro, se caracteriza por sus altos valores de incidencia de radiación solar; circunstancia que propicia la existencia de grandes extensiones con minerales denominados evaporitas que resultan de la evaporación del agua de mar, como es el caso del yeso (CaSO4 . 2H2O), la calcita o anhidrita (CaSO4) y la halita (NaCl). De ESSA, muy pocos estudios han enfocado sus esfuerzos en el aislamiento e identificación de las arqueas halófilas extremas que habitan en las áreas de concentración (21% sales totales) y vasos cristalizadores de cloruro de sodio (25% sales totales). Por ello, el propósito de este trabajo fue describir y relacionar filogenéticamente la composición de poblaciones de arqueas halófilas extremas cultivables presentes en la salmuera y en minerales evaporíticos de los vasos concentradores 9 y 10 y cristalizadores 19 y 20. El análisis polifásico consistió en el aislamiento de cepas de arqueas y bacterias fotótrofas anoxigénicas, microscopía de contraste de fases, microscopía electrónica de barrido (SEM) y secuenciación del ADN que codifica para el 16S rARN para el análisis filogenético. Además, se analizó la comunidad total por una aproximación independiente de cultivo que integró la amplificación de ADN -de muestras ambientales- que codifica para un fragmento del 16S rARN y posterior separación de productos en un gel de electroforesis en gradiente desnaturalizante (DGGE) para su posterior análisis estadístico. Se obtuvieron cinco cepas de los vasos concentradores: cuatro pertenecieron a miembros del género Halobacterium, cada una con morfologías coloniales diferentes; una tuvo 99% de similitud con la cepa DMS 11551 (No. acceso AF002984) denominada Halogeometricum borinquense. Del cristalizador se obtuvo una cepa de Haloarcula sp. Se presume sea la misma especie aislada por Javor et al., (1982), parcialmente estudiada y propuesta como Haloarcula californiae [...]
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