Aislamiento y caracterización del gen de la miostatina en la almeja mano de león Nodipecten subnodosus y análisis de su expresión en diploides y triploides
Abstract
La almeja mano de león Nodipecten subnodosus se considera un molusco con un importante potencial para su acuicultura en el Noroeste de México. Con la finalidad de incrementar la productividad en su cultivo se han desarrollado tecnologías como la triploidía, la cual ha sido asociada con un mejor crecimiento y peso del músculo aductor en moluscos pectínidos así como con una hipertrofia de las fibras musculares. Sin embargo en la almeja mano de león N. subnodosus no se ha observado un patrón consistente del crecimiento entre diploides y triploides como ha sido observado en otras especies. Existen diferentes hipótesis para explicar la ventaja que presentan los moluscos triploides sobre los diploides en crecimiento (mayor heterocigosidad; esterilidad y mayor disponibilidad de energía para crecimiento; e incremento en número y tamaño de células o hiperplasia e hipertrofia). En este trabajo se planteó una nueva hipótesis: que cuando ocurre un mejor crecimiento esto es resultado de una hipertrofia en células musculares de triploides, y esto se asocia a una expresión génica diferencial entre diploides y triploides, en particular de un gen conocido como controlador del crecimiento muscular. Tal gen es el gen de la miostatina o factor de crecimiento y diferenciación (gdf-8). Este gen pertenece a la superfamilia de factores transformantes de crecimiento beta (TGF-β) y su proteína actúa como regulador negativo del crecimiento, cuyo efecto ha sido demostrado por la hipertrofia e hiperplasia observada en algunos vertebrados mutantes o subexpresando este gen, mientras que la sobre-expresión del mismo ha sido asociada con una atrofia muscular y pérdida de masa corporal. En el presente estudio se buscó establecer si existía una asociación entre la hipertrofia y la expresión diferencial del gen de la miostatina en diploides y triploides de almeja N. subnodosus. Se aisló y caracterizó la secuencia del transcrito de la miostatina (MSTN) en N. subnodosus a partir de las secuencias existentes para otros dos pectínidos, Argopecten irradians y Chlamys farreri. A partir de tal secuencia, se localizó la expresión de la MSTN por hibridación in situ en las células del músculo aductor tanto de diploides como triploides, específicamente en el sarcoplasma de las fibras musculares estriadas [...] The lion-paw scallop Nodipecten subnodosus is considered a mollusk species with an important potential for aquaculture in northwest Mexico. Because other triploid pectinids are known to grow better than diploids, showing larger adductor muscles and a muscle fiber hypertrophy, triploid technologies aimed to increase its yield have been developed. However, in contrast to other scallop species, no consistent differential pattern of growth has been found when evaluating diploid and triploid lion-paw scallops. Several hypotheses have been proposed to explain the advantage of triploid mollusks over diploids (increased heterozygosity; sterility resulting in a surplus of energy for growth; and increased cell size and number, or hypertrophy and hyperplasia). In this work a new hypothesis was proposed: when triploids grow larger than diploids it is because there is hypertrophy of muscle cells and this can be associated with a differential gene expression, particularly of one gene known as a muscle growth regulator. Such a gene is the myostatin or growth and differentiation factor-eight (gdf-8). The myostatin gene belongs to the superfamily of transforming growth factors beta (TGF-β), and its protein acts as a negative regulator of growth as demonstrated in vertebrates by the hypertrophy and hyperplasia occurring in non-expressing or low-expressing mutants, and the muscular atrophy and loss of muscle mass seen in individuals over-expressing it. The possible association between hypertrophy and a differential expression of myostatin (MSTN) between diploid and triploid lion-paw scallop’s N. subnodosus was evaluated in this work. First, the partial sequence of the MSTN transcript in N. subnodosus was isolated and characterized utilizing the available sequences for two other pectinids: Argopecten irradians & Chlamys farreri. With the isolated sequence, the MSTN transcript was localized in the striated adductor muscle cells of diploid and triploids by in situ hybridization, finding it specifically in the sarcoplasm of muscle fibers [...]
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