Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) es el agente epidemiológico de la Paratuberculosis; una enfermedad crónica gastrointestinal en rumiantes. Los antígenos recombinantes MAP1609c y MAP0586c han demostrado inmunoprotección en el modelo murino frente a un reto infeccioso experimental con MAP. Se ha sugerido el desarrollo de vacunas orales basadas en antígenos recombinantes producidas en plantas como una alternativa potencial para el control enfermedades infecciosas. Con base a lo anterior se formuló la hipótesis: si los antígenos MAP1609c y MAP9586c de MAP son expresados correctamente, su inmunoreactividad podrá ser evaluada utilizando anticuerpos de animales infectados naturalmente. El objetivo de este trabajo fue analizar la producción e inmunoreactividad de los antígenos MAP1609c y MAP0586c en alfalfa. Los embriones de plantas transgénicas fueron individualizados y analizados mediante un bioensayo de generación de callo y PCR de punto final, estableciéndose 50 líneas con el gen MAP0586c y 24 líneas con el gen MAP1609c. La expresión de antígenos recombinantes en alfalfa se analizó utilizando anticuerpos de animales infectados naturalmente con MAP siendo la línea 20 (MAP1609c) y 41 (MAP0586c), las de mayor expresión. La inmunoreactividad de extractos proteicos de las líneas 20 y 41 de alfalfa se analizó con 35 sueros distintos de animales infectados naturalmente observando diferencias en los títulos de anticuerpos mediante ELISA indirecta. Se expresaron los antígenos en Escherichia coli y fueron analizados mediante Western blot y ELISA indirecta utilizando anticuerpos específicos producidos en ratón mediante inmunización con ADNp. Se observaron diferencias significativas frente a extractos proteicos de E. coli entre los grupos de ratones inmunizados, siendo el grupo inmunizado con el gen MAP1609c el de mayor producción de anticuerpos específicos. Los datos obtenidos se analizaron mediante Análisis de Varianza de Rangos Kruskal-Wallis de una vía, ANOVA de una o dos vías dependiendo del experimento. Las proteínas recombinantes expresadas en alfalfa fueron reconocidas por anticuerpos de animales infectados naturalmente, siendo la línea 41 y 20 las de mayor expresión [...]Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) is the epidemiological agent of Paratuberculosis; a chronic ruminant gastrointestinal disease. Recombinant antigens MAP1609c and MAP0586c have conferred protection in the mouse model against an infectious challenge with MAP. Moreover, it has been suggested the development of edible vaccines based in recombinant antigens produced in plants as a potential alternative for control of infectious diseases. Based on the above hypothesis was formulated: if antigens MAP1609c and MAP0586c of MAP are expressed correctly, its immunoreactivity could be assessed using antibodies from naturally infected animals. The objective of this study was to analyze the production and immunoreactivity of recombinant antigens MAP1609c and MAP0586c in Alfalfa. Transgenic plant embryos were individualized and analyzed through a callus generating bioassay and PCR, and 50 and 24 plant lines with genes MAP0586c and MAP1609c, respectively, were established. Recombinant antigen expression was analyzed using antibodies from MAP naturally infected animals, lines 20 (MAP1609c) and 41 (MAP0586c) showed the highest expression. Immunoreactivity of alfalfa proteic extracts of lines 20 and 41 was analyzed using 35 different sera from naturally infected animals and antigen recognition was observed as well as differences in antibodies titles in sera in ELISA test. Antigens were expressed in Escherichia coli and then analyzed through Western blot and indirect ELISA using specific antibodies produced in pDNA immunized mice. Significative differences between immunized mice groups were observed using E. coli extracts, and MAP1609c immunized group showed the highest specific antibody production. Data was analyzed through one way Kruskal-Wallis Analysis of Variance of Ranks, and one or two way ANOVA, depending on the experiment. As conclusions, recombinant proteins expressed in alfalfa were recognized by naturally infected animals, and lines 41 and 20 showed the highest expression [...]