Evaluación del silenciamiento génico de la miostatina en el músculo aductor de nodipecten subnodosus
Abstract
La almeja mano de león Nodipecten subnodosus es un molusco pectínido de importancia comercial en el estado de Baja California Sur debido a su demanda y alto valor comercial ya que su mercado es principalmente para exportación. Esta especie se caracteriza por poseer un músculo aductor grande, de interés gastronómico por su sabor. Durante el crecimiento del músculo en vertebrados participan diferentes genes en su regulación; uno de estos es la MIOSTATINA, la cual es un potente regulador negativo de la masa muscular esquelética. El estudio de este gen ha interesado a diversos campos de la ciencia, desde ciencias pecuarias hasta ciencias médicas, lo cual ha resultado en que se ha estudiado en un gran número de especies de vertebrados. En el caso de invertebrados, particularmente pectínidos, el gen ortólogo de la miostatina (mstn) de vertebrados se ha caracterizado en Argopecten irradians, Chlamys farreri, Patinopecten yessoensis, A. purpuratus y recientemente en Nodipecten subnodosus. El silenciamiento génico a través del desencadenamiento del proceso de ARN de interferencia es una de las estrategias utilizadas para determinar la función de un gen. Recientemente en moluscos esta estrategia es utilizada para conocer la función de diferentes genes de interés para la acuacultura y genes involucrados en la inmunidad de los huéspedes intermediarios de la esquistosomiasis. Sin embargo, son pocos los estudios realizados en moluscos utilizando el ARN de interferencia y aún se encuentra en proceso el descubrimiento de todos los componentes de la maquinaria del silenciamiento génico en moluscos. En el presente trabajo se evaluó la doble cadena de ARN (dsRNA) para silenciar el ARN mensajero de la mstn. Se diseñó un experimento con una duración de 30 días para el silenciamiento del transcrito de la mstn a través de dsRNA, y en forma paralela evaluar la activación del mecanismo de interferencia por dsRNA usando el gen vital que codifica para la enzima GAPDH, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (gapdh), además de utilizar un control negativo inyectando dsRNA de un gen no presente en el genoma de N. subnodosus el cual fue el gen mejorado de la proteína verde fluorescente (egfp, enhanced green fluorescent protein) para evaluar la introducción de dsRNA sin inducir efectos deletéreos o mortalidades [...] The lion-paw scallop, Nodipecten subnodosus, is a mollusk of commercial importance in the state of Baja California Sur due to its high demand and commercial value. This species is characterized by having a large adductor muscle that is of gastronomic interest for its taste. Among vertebrates, skeletal muscle growth is regulated by several genes, one of which is myostatin (mstn). MSTN is known to be a potent negative regulator of skeletal muscle mass. This gene has been of interest in various fields of science, from animal science to medical science, which has resulted in a large number of vertebrate species being studied. In the case of invertebrates, particularly scallops, the mstn gene has been characterized in Argopecten irradians, Chlamys farreri, Patinopecten yessoensis, A. purpuratus and more recently in Nodipecten subnodosus. Gene silencing using RNA interference is widely used to study the function of a gene. Recently, in mollusks, this strategy has been used to determine the function of various genes of interest for aquaculture and genes involved in immunity of the intermediate hosts of schistosomiasis. However, there are few studies on mollusks using RNA interference and all components of the machinery of gene silencing in mollusks are still in the discovery process. In this work, a double-stranded RNA (dsRNA) was used to silence the mstn transcript. A 30 day experiment was designed, carrying in parallel an evaluation of the activation of the mechanism of interference by dsRNA using the vital gene gapdh encoding for the glyceraldehyde3-phophate dehydrogenase enzyme, GAPDH. The enhanced green fluorescent protein gene (egfp) was used as a negative control to evaluate the introduction of dsRNA that would not result in deleterious effects or mortality [...]
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