Serodiagnóstico e inmunogenicidad producida por proteínas de la glándula salival de Oestrus ovis (Diptera: Oestridae) en ovejas y cabras
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CARLOS ELIUD ANGULO VALADEZ
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En el contenido de la glándula salival larvaria de Oestrus ovis (Díptera:Oestridae) se encuentran antígenos reconocidos por las IgG de ovejas infectadas que pueden ser útiles para el diagnóstico de la estrosis ovina y caprina. Adicionalmente, las larvas parásitas de Hypoderma lineatum (Díptera:Oestridae) secretan proteasas antigénicas usadas para el diagnóstico de la hipodermosis bovina en programas de erradicación. Los objetivo general de esta tesis fue investigar las proteasas-antigénicas y los antígenos en el contenido de la glándula salival de O. ovis y determinar su valor antigénico para el diagnóstico de la estrosis en cabras y ovejas. Para ello se capturaron larvas de tercer estadio (L3) y moscas grávidas para obtener antígenos salivales y larvas de primer estadio (L1) infectivas de O. ovis. Se disectaron las larvas L3 para obtener la glándula salival del parásito y sus productos fueron analizados en pruebas enzimáticas (Apyzim, Azocoll, Zimogramas) e inmunoblots y en el desarrollo de pruebas de ELISA para el serodiagnóstico de la estrosis en ovejas y cabras. Se registró el número y desarrollo de larvas de O. ovis encontradas en cabras y ovejas infectadas. Además, se colectaron muestras de suero sanguíneo de caprinos y ovinos infectados experimental y naturalmente así como moco nasal de ovinos. Las ovejas del rebaño estudiado se organizaron en tres grupos de acuerdo al Progenitor que las engendró. Los resultados encontrados fueron: se detectaron las actividades enzimáticas de fosfatasa ácida, naftol-AS-BI-fosfohidrolasa, esterasa (C4), esterasa lipasa (C8), leucina arilamidasa, α-gludosidasa y N-acetil-β-glucosaminidasa. El pH óptimo de actividad proteolítica fue de 8.0; mientras que la actividad proteolítica se incrementó con la temperatura (10 a 50 °C). Además, las enzimas proteolíticas reaccionaron solamente con inhibidores para serin-proteasas. En los zimogramas, se detectaron bandas de actividad proteolítica en el rango de 20 a 63 kDa; y en los inmunoblots se observaron tres bandas antigénicas, una de ellas relacionada a una banda proteolítica (63 kDa). En ovejas, se encontraron correlaciones negativas entre el establecimiento larvario y/o el desarrollo larvario por un lado y la intensidad de las respuestas sistémicas y locales de IgG por el otro en dos de los tres grupos Progenitor-progenie estudiados [...] The major antigens recognized by IgG from Oestrus ovis (Díptera:Oestridae) infected sheep have been found in salivary gland content that can be useful for diagnosis of ovine and caprine oestrosis disease. In addition, parasitic larvae of Hypoderma lineatum (Díptera:Oestridae) secrete antigenic proteases used for bovine hypodermosis diagnosis in eradication programs. The general objective of this thesis was to investigate antigenic proteases and proteolytic activity in salivary gland content of O. ovis third instars and to determine their antigenic value for sheep and goat oestrosis diagnosis. Third instars (L3) and gravid flies were collected to obtain salival antigens and infective first instars of O. ovis. L3 larvae were dissected and their contents were analyzed in enzymatic tests (Apyzim, Azocoll, Zymogramas) and immunoblots as well as in ELISA test development to serodiagnosis of sheep and goats oestrosis. The number and development of O. ovis larvae found in sheep and goats were recordered. Aditionally, blood serum samples from sheep and goats infected naturally or experimentally were used as well as nasal mucus of sheep. The sheep of the flock were divided into three groups Ram-families. The results found were: enzymatic activities in salivary gland contents of acid phosphatase, naphthol-AS-BI-phosphohydrolase, esterase (C4), esterase lipase (C8), leucine arylamidase, α-glucosidase and N-acetyl-β-glucosaminidase, were detected. Optimum pH for proteolytic activity was 8.0, while proteolytic activity increased with temperature (10 to 50 °C) then drastically decreased at 60 °C. Proteases in O. ovis salivary gland products belong to the serine subclass. In Zymograms, bands of proteolytic activity were detected in the 20 to 63 kDa range; the immunoblot showed three antigenic bands, one of them related to a protease band (63 kDa). In ovine specie, negative correlations among larval establishment and/or larval development on the one hand and intensity of local or systemic IgG responses on the other hand were found in two out of three studied ram-families [...]
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