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dc.contributor.advisorTovar Ramírez, Darieles_MX
dc.contributor.authorLiñan Rivera, Christianes_MX
dc.date.issued2008es_MX
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/212
dc.description.abstractLa vitamina A (VA) es un nombre genérico que describe a todos los compuestos químicos que presentan la misma actividad biológica que el retinol. La entrada de la VA al núcleo celular esta regulada por la acción de los Receptores del Acido Retinoico (RAR´s). El RA actúa como inductor en la expresión de más de 500 genes, incluidos los genes de la familia Hox. Los factores transcripcionales de los genes Hox son los principales reguladores que controlan el desarrollo embrionario. Particularmente, los genes Hoxa5 regulan la dirección antero-posterior de la región intestinal en vertebrados. Estudios recientes han demostrado que un balance inadecuado de VA puede causar malformaciones en larvas de peces marinos, lo cual impacta en la rentabilidad de los cultivos, debido a las altas tasas de mortalidad y la disminución en la calidad del producto. Dichas malformaciones se cree están asociadas con cambios en la expresión normal de genes implicados en el desarrollo embrionario y en las rutas retinoicas. Por lo que en este estudio se planteó como objetivo general observar los efectos que causan altos niveles de VA en el alimento sobre la expresión de los genes RARα y Hoxa5, implicados en el control del desarrollo inicial de la cabrilla arenera Paralabrax maculatofasciatus. Para ello, se realizó un cultivo larvario en un sistema de circulación cerrada ubicado en la Unidad Piloto de Maricultivo (UPIMA) del CICIMAR-IPN. En dicho sistema se utilizaron 6 tanques para llevar a cabo los desarrollos larvarios correspondientes a este trabajo. De los cuales, 3 tanques se utilizaron como controles positivos (sin enriquecimiento del alimento con VA) y 3 tanques se utilizaron para el tratamiento de enriquecimiento del alimento vivo con VA. La alimentación exógena inició a partir de los dos días después de la eclosión (DDE), que es cuando concluye la absorción del saco vitelino en la cabrilla arenera Las larvas fueron alimentadas a saciedad aparente tres veces al día (08:00, 14:00 y 18:00) con rotíferos (Brachionus plicatilis) durante los primeros 15 días. Los siguientes 10 días se alimentaron con nauplios de dos días de Artemia (Artemia sp. Microfeast Artemia Cyst, Burns Philp Foods Inc., Oklahoma, USA). Para culminar alimentándolas con juveniles de Artemia de 5 días hasta los 30 DDE. El alimento vivo fue enriquecido con una emulsión comercial (Super SELCO 3000©). Para el tratamiento con vitamina A, se preparó una solución con 0.6 g de vitamina A (Acetato de Vitamina A, 20,000 UI/g) por cada 500 g de SELCO. Se realizaron análisis por medio de cromatografía liquida de alta resolución para detectar los niveles de inclusión de la VA en el alimento vivo y en las larvas. Se realizó una cuantificación relativa de la expresión genética mediante PCR en tiempo real, utilizando la bioquímica SYBR-GREEN© en un equipo ABI PRYSM 7000 SDS (Applied Biosystems). Se obtuvieron las secuencias parciales específicas de la cabrilla arenera para los genes RARα (384pb. Número de acceso 1088219 NCBI) y Hoxa5 (147 pb. Número de acceso 1088190 NCBI). Los resultados que se obtuvieron en los análisis cromatográficos fueron cualitativos debido muy probablemente a que el nivel de vitamina utilizado resultó ser mucho mas bajo en la práctica que el valor teórico calculado. Asimismo, aunque sí se logró incorporar un poco de vitamina en las presas vivas, es muy probable que cierta cantidad se perdiera mediante desnaturalización por fuentes luminosas y otra cantidad importante por lixiviación dentro de los tanques de cultivo. Por este motivo no fue posible encontrar diferencias estadísticamente significativas entre el crecimiento, así como tampoco entre los patrones de expresión de los genes Hoxa5 y RARα, de los individuos sometidos a los tratamientos. Independientemente de no haber encontrado diferencias entre los tratamientos, si fue posible cuantificar exitosamente los patrones de expresión de los genes. En este sentido, para el caso del gen RARα, se encontró que a los 5 DDE existe una sobre expresión del orden de los 2x que continúa en aumento hasta alcanzar un valor aproximado de 2.5x a los 15 DDE. A partir del día 20, se observa un claro decremento en la expresión llegando a valores estables cercanos al 1.5x hasta los 30 DDE. Posterior a este intervalo de tiempo, a partir de los 20 DDE, se observó un decremento en los valores de la expresión del gen. Los valores de trascripción de los RARα coincidieron en buena medida con los valores de expresión del gen Hoxa5 (2x a los 5 DDE; 2.5x a los 15 DDE; 1.5x.a los 20 DDE; 1x a los 25 y 30 DDE) y dado que los genes Hox se activan en ventanas de tiempo y espacio muy específicas, es posible concluir que la ventana de expresión del Hoxa5 en la cabrilla arenera se encuentra entre los 5 y los 20 DDE. Finalmente, al observar los individuos que presentaron malformaciones, en la mayoría de los casos, éstas se encontraron en la región mandibular. Con estas observaciones, se puede decir que toda perturbación de las vías metabólicas de la vitamina A, afectan la expresión de genes que ésta controla, provocando una alteración en el desarrollo del organismo.es_MX
dc.language.isoeses_MX
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.titleEfecto de altos niveles de vitamina A en la expresión de los genes HOXa5 y RARα, en el desarrollo inicial de Paralabrax maculatofasciatus (Teleostei: Serranidae)es_MX
dc.documento.idcibnor.2008.linan_ces_MX
dc.documento.indicelinan_ces_MX
dc.documento.instcibnores_MX
dc.dirtesis.gradoMaestría en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturaleses_MX
dc.dirtesis.disciplinaAcuiculturaes_MX
dc.dirtesis.universidadCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.dirtesis.facultadPosgrado en Recursos Naturaleses_MX
dc.documento.fechaAgosto, 2008es_MX
dc.description.abstractenVitamin A (VA) is a generic name that describes all chemical compounds that present the same biological activity as retinol. The entrance of VA to the cellular nucleus is regulated by the action of the Retinoic Acid Receptors (RAR´s). The retinoic acid acts as an inductor of the expression of more than 500 genes including the members of the Hox family. The transcriptional factors of Hox genes are the main responsible in regulating the embryonic development. Specifically, Hoxa5 gene regulates the antero-posterior differentiation in the vertebrate intestinal region. Recent studies have demonstrated that an inadequate balance of VA can induce malformations in marine fish larvae. This impacting directly on the cost benefits of the activity, because of high mortality rates and low quality of the product. Malformations are known to be associated with abnormal expression of genes implicated in the early development and in the retinoic pathway in mammals an fish larvae. The present study is aimed to observe the effects of high rates of VA in the expression of RARα and Hoxa5 genes in Paralabrax maculatofasciatus larvae. For this purpose, a larvae culture was carried out in the Unidad Piloto de Maricultivo (UPIMA) located at CICIMAR-IPN. Larvae were fed from 2 days after hatching (DAH) with live preys (rotifers and Artemia) enriched with a commercial emulsion (Super SELCO 3000©). For VA treatment a solution was prepared with 0.6 g VA (Vitamin A acetate, 20,000 UI/g, ICN – catalog number 160079) for each 500 g of SELCO. High performance liquid chromatography (HPLC) analyses were performed in order to detect retinol in live preys and larvae. A relative quantification of the gene expression was done by real time PCR using the chemistry SYBR-GREEN© in an ABI PRYSM 7000 SDS (Applied Biosystems) equipment. The partial sequences of 384pb. RARα (NCBI Accession number 1088219) and 147 pb. Hoxa5 (NCBI Accession number 1088190) were obtained for P. maculatofasciatus. The data obtained from HPLC analyses were only qualitative because of problems concerning the enrichment protocol. For the reason of this, it was not possible to detect statistical differences between the treatments. But it was possible to describe the gene expression patterns of RARα and Hoxa5. For RARα an over expression was found at 5 DAH of 2x (respect to the calibrator) that increased up to2.5x at 15 DAH. A down regulation was found at 20 DAH dropping to 1.5x on 30 DAH. A similar phenomenon has been observed in studies with European sea bass larvae, which some authors attribute to the importance of this receptors in cell differentiation during particular stages in development, and particular regions of the organism. For the spotted sand bass it has been demonstrated that during 5 to 15 DAH a mayor synthesis of proteins is occurring owed to drastic morpho physiological changes. This translates in a demand for the expression of the receptors needed for its regulation. The down regulation observed after 20 DAH probably reflected that the mayor changes in the development process were about to finish (between 16 and 20 DAH), so the receptor levels returned to 1x. The levels of expression for RARα resembled in good manner the ones for Hoxa5 (2x at 5 DAH; 2.5x at 15 DAH; 1.5x.at 20 DAH; 1x at 25 and 30 DAH). This could be explained in the same way as for RARα, because Hoxa5 gene is the responsible for the regulation of cell differentiation processes in the abdominal region, so the great demand of new cells between 5 and 20 DAH was being reflected in the levels of expression of the gen. Hox genes are regulated during very specific windows of time, so for P. maculatofaciatus the window for Hoxa5 was found to be between 5 and 20 DAH. Finally, when observations of the malformed larva were performed, almost all cases were found to present malformations in the mandible region.es_MX
dc.documento.subjectVitamina A; genes Hox; desarrollo inicial; larvas de peces; Paralabrax maculatofasciatuses_MX


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  • Tesis Digitales CIBNOR
    Esta colección contiene texto completo de las tesis de Maestría y Doctorado del Programa de Posgrado del CIBNOR.

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