Efecto de la levadura Debaryomyces hansenii silvestre e inhibida de su actividad ornitin-descarboxilasa sobre el desarrollo larvario de la cabrilla arenera (Paralabrax maculatofasciatus)

Abstract

El interés por el uso de probióticos en la acuacultura se ha incrementado en los últimos años, con fines de mejorar los rendimientos de los cultivos larvarios. Tal es el caso del uso de la levadura Debaryomyces hansenii, que secreta a las poliaminas putrescina (put), espermidina (spd) y espermina (sp), moléculas indispensables para el crecimiento y diferenciación celular. El objetivo de este trabajo fue evaluar la inclusión de la levadura D. hansenii silvestre e inhibida químicamente de su actividad ornitin-descarboxilasa (ODC), sobre el desarrollo del sistema digestivo larvario de la cabrilla arenera (Paralabrax maculatofasciatus), especie con potencial de cultivo y demanda comercial. Para conocer la producción de poliaminas se realizó la cinética de crecimiento de D. hansenii en condiciones normales y en presencia del inhibidor DFMO (-Difluoro-metil-ornitina) para bloquear irreversiblemente la actividad enzimática ODC y se cuantificaron por HPLC. Larvas de la cabrilla arenera fueron alimentadas a partir del día 20 después de la eclosión con diferentes dietas microparticuladas conteniendo levaduras silvestres (ODC +) equivalente a 106 UFCg-1, levaduras inhibidas en su actividad ODC (ODC -) y una dieta control sin levaduras. Durante el tiempo de administración de las dietas, se tomaron muestras cada 5 días para conocer el crecimiento, supervivencia, actividad y expresión (por RT-PCR cuantitativo mediante sondas Taqman®) de enzimas digestivas (tripsina, lipasa, amilasa y aminopeptidasa) de la larva. Los resultados obtenidos muestran que el inhibidor DFMO (2mM) no afecto el crecimiento ni la producción de poliaminas en D. hansenii (P> 0.05) por lo que suponemos que puede existir una vía alterna en la biosíntesis de estas moléculas o que la ruptura de la pared celular de las levaduras no se realizó adecuadamente. En cuanto al cultivo larvario, la supervivencia larval fue significativamente diferente con el 13.05  0.54% para ODC (+), 11.60  0.92% con ODC (-) y del 10.34  1.23% para la dieta control. La actividad de las enzimas tripsina, lipasa y aminopeptidasa presentaron los niveles mas altos en los grupos alimentados con ODC (+); en cuanto la actividad amilasa, el grupo control presentó los niveles de actividad más altos, lo que nos indica un mayor retraso en la maduración digestiva de la larva con esta dieta. De la expresión de genes observamos que los niveles de ARN codificantes para tripsina y aminopeptidasa pueden ser estimulados positivamente con la dieta que contiene ODC (-), mientras que para lipasa se observan mayores niveles para el control, sin embargo existe un incremento progresivo en las larvas alimentadas con ODC (-). Los niveles de ARN para amilasa, presentan el mismo patrón que la actividad, mayor en la dieta control con respecto a las alimentadas con ODC (-). Lo anterior sugiere que la dieta que contiene levaduras productoras de poliaminas, puede modificar o inducir cambios importantes en el patrón de secreción y expresión enzimática digestiva, permitiendo que la maduración pancreática e intestinal ocurra.