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dc.contributor.advisorGarcía Carreño, Fernando Luises_MX
dc.contributor.authorCota Ruiz, Abdiel Kenies_MX
dc.date.issued2007es_MX
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/191
dc.description.abstractLa melanosis post mortem es un problema que va en detrimento de las propiedades sensoriales de los crustáceos. El desarrollo de melanina parece depender de fenoloxidasas endógenas sintetizadas en los hemocitos, sin embargo, una proteína más abundante, la hemocianina (Hc), podría estar involucrada y ser más importante. Se investigó la actividad de fenoloxidasa (PO) de la Hc, así como también el mecanismo de conversión y propiedades catalíticas. La Hc del plasma del camarón blanco, Penaeus vannamei, fue purificada y convertida en una proteína con actividad de PO (HcPO) utilizando agentes tanto químicos como enzimáticos; el tratamiento con SDS fue el que generó una mayor conversión. Por su parte, la quimotripsina fue el activador enzimático que mayor tasa de conversión generó. Utilizando electroforesis preparativa, los agregados 6-mer y 12-mer de la Hc fueron purificados, el último agregado fue el que presentó actividad de fenoloxidasa, indicando que la actividad depende también de la forma cómo se conforman las subunidades a nivel cuaternario. La HcPO puede utilizar tanto sustratos difenólicos como monofenólicos. La HcPO presenta óptimos de temperatura (45 °C) y pH (7.6) similares a los que despliegan fenoloxidasas de artrópodos. Tiene una Km de 1.48 mM y una Vmax (x 1000) de 30.5 U/mg cuando se utiliza L-DOPA como sustrato. La Hc es estable al congelado y descongelado a –20 ºC, condiciones a las cuales se sigue observando el desarrollo de melanina. Adicionalmente, la cantidad de potenciales moléculas con actividad de fenoloxidasa derivadas de la hemocianina sugieren que esta proteína puede ser un inductor clave en melanosis post mortem.es_MX
dc.language.isoeses_MX
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.titleCaracterización enzimática de la actividad de fenoloxidasa de la hemocianina de Penaeus vannameies_MX
dc.documento.idcibnor.2007.cota_aes_MX
dc.documento.indicecota_aes_MX
dc.documento.instcibnores_MX
dc.dirtesis.gradoMaestría en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturaleses_MX
dc.dirtesis.disciplinaBiotecnologíaes_MX
dc.dirtesis.universidadCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.dirtesis.facultadPosgrado en Recursos Naturaleses_MX
dc.documento.fechaNoviembre, 2007es_MX
dc.description.abstractenMelanosis is a major concern in prolonging the shelf life of crustaceans. This kind of discoloration appears to depend on endogenous polyphenol oxidases (PO) located in hemocytes; however, a more abundant protein, hemocyanin (Hc), may be involved. The PO activity of Hc, the mechanism of conversion and the catalytic properties were investigated. The pure Hc was converted into phenoloxidase-like enzyme (HcPO) using chemical and enzymatic treatments. The SDS treatment was the most potent converter. Additionally, chymotrypsin treatment was the major enzymatic converter of Hc. Using preparative electrophoresis, pure 6-mer and 12-mer aggregates were obtained, with the latter aggregate the only one with phenoloxidase activity. This demonstrated that the activity depends on the way how subunits are aggregated at quaternary level. This novel enzyme can use mono and diphenolic substrates to generate melanin and has a similar biochemical pattern compared with crustaceans POs. HcPO posses a Km value of 1.48 mM and a Vmax value (x 1000) of 30.5 U/mg when L-DOPA is used as substrate. Hc is stable when frozen and thawed at –20 °C, and its amount in hemolymph is three orders of magnitude higher than PO. These results suggest that this protein is key inductor of black spots in shrimp.es_MX
dc.documento.subjectActividad de fenoloxidasa (PO); mecanismo de conversión; propiedades catalíticas; hemocianina; Penaeus vannameies_MX


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  • Tesis Digitales CIBNOR
    Esta colección contiene texto completo de las tesis de Maestría y Doctorado del Programa de Posgrado del CIBNOR.

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