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dc.contributor.advisorVázquez Juárez, Ricardoes_MX
dc.contributor.authorOlalde Rodríguez, Alicia Mónicaes_MX
dc.date.issued2005es_MX
dc.identifier.urihttp://dspace.cibnor.mx:8080/handle/123456789/110
dc.description.abstractLarge-scale egg production of marine fish has been a bottleneck in aquaculture systems. Low survival rates in rearing systems are associated with the incapacity of the larvae to adapt to the feeding sequence during the first weeks of culture (Kolkovsky et al., 1997). The change from endogenous to exogenous digestion is concomitant with the morphological and functional transformations of the digestive tract in larvae. Previous reports indicate that some components of the artificial diets, as well as live prey, regulate some digestive enzyme genes. Low levels of some cytosolic enzymes, associated with an increase in enzymes of the brush border membranes, dictates enterocyte maturation in mammals and fish. Contrary to the increasing information on digestive enzymes as maturation digestive indicators, this is the first report which considers the immunoglobulin M as a maturation parameter in marine fish larvae Eggs were obtained from natural spawns of spotted sand bass broodstock maintained under controlled conditions in the Laboratory of Experimental Biology at CICIMAR-IPN (Rosales-Velázquez, 1997). The larvae were reared in a closed recirculating system. Microalgae Nannochloropsis oculata (300 000 cells.ml-1) was added until 12 dah. Larvae were fed rotifers Brachionus plicatillis (1-10 rotifers. ml-1) from 2-15dah, with Artemia sp. nauplii after 15dah, and juveniles (2-6 nauplii ml-1) as a control treatment. Three types of microcapsules were supplied as experimental treatments on 15dah, with 0%, 0.1%, and 0.3% espermine. Larvae were fed live prey and microcapsules for 5 days. We obtained relative quantification of amylase and immunoglobulin M gene expression in larvae of spotted sand bass by RNA extraction and quantitative polymerase chain reaction (RT-QPCR) using Gene Expression assays from the Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consisting of a mix of unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). The TaqMan® probes were designed based on the amylase and immunoglobulin M partial sequences of P. maculatofasciatus. The eukaryotic 18S rRNA (Applied Biosystems) was used as the endogenous control for normalizing mRNA levels of the target gene. For the enzyme amylase, the forward primer was 5´GTCTGGTCGGTCTGTTGGA-3´ and the reverse primer was 5´CTTGTTCATGAAGTCAGCAACCTT-3´. For immunoglobulin M, the forward primer was 5´TTCAAAACTGCAGACTGGAACAGT-3´and the reverse primer was 5´CACAGTTCCTTGATGGACTCATGAT-3´. Thermal cycling and fluorescence detection were conducted with the 7000 Sequence Detection Systems (Applied Biosystems). QPCR was monitored by the ABI Prism 7000 SDS software and we obtained the Amylase and IgM expression levels of spotted sand bass larvae fed with live prey, which show a increase from 5-15dah, followed by a significant decrement, probably by a consequence of digestive tract differentiation. Alvarez-González et al. (2001) reported amylase activity in the spotted sand bass larvae at 1dah, reaching highest activity at mouth opening. Similar amylase activity has been reported in Dicentrarchus labrax, Coregonus lavaretus, and Plecoglossus altivelis altivelis (Tanaka et al., 1972; Rösch and Segner, 1990; Breuil et al., 1997). From 10-15dah, the amylase and IgM expression in larvae fed live prey decreased, and the same pattern was observed in larvae fed microcapsulated diet, but only from 15-25dah. Levels of IgM and amylase expression correlates with growth observed until 25dah in microcapsulated feed provided to larvae. While previous reports indicate that amylase and IgM abundance depends on complete yolk absorption, those reports did not show amylase and IgM falling after 5dah, as we did. Finally, we think that the relative quantification of the IgM must be recognized as an important contribution, since, reports related to basal levels of gene expression in marine fish larvae are rather scarce yet.es_MX
dc.language.isoeses_MX
dc.publisherCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.titleEfecto de la espermina en la expresión del gen de la amilasa e inmunoglobina M durante el desarrollo larvario de la cabrilla arenera Paralabrax maculatofasciatuses_MX
dc.documento.idcibnor.2005.olalde_aes_MX
dc.documento.indiceolalde_aes_MX
dc.documento.instcibnores_MX
dc.dirtesis.gradoMaestría en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturaleses_MX
dc.dirtesis.disciplinaBiotecnologíaes_MX
dc.dirtesis.universidadCentro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.es_MX
dc.dirtesis.facultadPosgrado en Recursos Naturaleses_MX
dc.documento.fechaAgosto, 2005es_MX
dc.description.abstractenEl sistema de cultivo larvario de peces marinos ha sido hasta la fecha un cuello de botella en la acuacultura. Las bajas tasas de supervivencia en dichos sistemas se asocian a la incapacidad de las larvas para adaptarse a la secuencia de alimentación durante las primeras semanas de la crianza (Kolkovsky et el al., 1997). El cambio de alimentación endógena a exógena es concomitante a las transformaciones morfológicas y funcionales del tracto digestivo en larvas. Estudios previos indican que algunos componentes de las dietas inertes, así como alimento vivo, regulan la expresión de algunos genes de enzimas digestivas. Un bajo nivel de enzimas citosólicas, asociado a un aumento en las enzimas de la membrana del borde de cepillo, determinan enterocitos maduros en mamíferos y en peces. Aunado a la información sobre los patrones de expresión y actividad enzimática digestiva como indicadores de maduración digestiva (Tovar- Ramirez et al., 2002) éste es el primer informe que considera la Inmunoglobulina M como parámetro de maduración en larvas de peces marinos. Se obtuvieron huevos de un desove natural de reproductores de cabrilla arenera mantenidos bajo condiciones controladas en el laboratorio de Biología Experimental en CICIMAR-IPN (Rosales-Velásquez, 1997). Las larvas fueron sembradas en un sistema de recirculación cerrada y alimentadas con la microalga Nannochloropsis oculata (300,000 cells.ml-1) hasta 12dde. Las larvas fueron alimentadas con el rotífero Brachionus plicatillis (1-10 rotíferos. ml-1) de 2-15dde, con nauplios de Artemia sp. después de 15dde, y juveniles de artemia (2-6 nauplios ml-1) como tratamiento control. Tres tipos de microcápsulas fueron elaboradas como tratamientos experimentales para el 15dde, conteniendo 0%, 0.1%, y 0.3% de espermina. Las larvas fueron coalimentadas con alimento vivo y las microcápsulas por 5 días. Se obtuvo la cuantificación relativa de la expresión del gene de la amilasa y de la inmunoglobulina M en larvas de cabrilla arenera mediante extracción y la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (RT-QPCR) usando Gene Expression assays de Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consistiendo en una mezcla de unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). Las sondas TaqMan® MGB (FAM™ dye-labeled) fueron diseñadas en base a las secuencias parciales de la amilasa y de la inmunoglobulina M de P. maculatofasciatus. El rRNA eucariótico 18S (Applied Biosystems) fue utilizado como control endógeno para normalizar los niveles del mRNA del gene blanco. Para la enzima amilasa, el primer sentido fue 5'GTCTGGTCGGTCTGTTGGA-3 ' y el primer antisentido fue 5'CTTGTTCATGAAGTCAGCAACCTT-3 '. Para la inmunoglobulina M, el primer forward fue 5'TTCAAAACTGCAGACTGGAACAGA-3' y el primer reversa 5'CACAGTTCCTTGATGGACTCATGAT-3 '. El QPCR fue conducido en un sistema 7000 Sequence Detection Systems (Applied Biosystems). obteniendo un aumento en los niveles de expresión de amilasa e IgM en larvas alimentadas con presas vivas del 5-15 dde, seguidos por un decremento significativo, probablemente como consecuencia de la diferenciación digestiva de la zona. Alvarez-González et el al. (2001) detectaron actividad de amilasa en larvas de cabrilla arenera desde el 1dde, alcanzando la actividad más alta con la abertura de la boca. Actividad similar de amilasa se ha encontrado en Dicentrarchus labrax, Coregonus lavaretus, and Plecoglossus altivelis altivelis (Tanaka et al., 1972; Rösch and Segner, 1990; Breuil et al., 1997). De 10-15 dde, la expresión de amilasa y de IgM en larvas con dieta viva disminuyo, y el mismo patrón fue observado en larvas con dietas microcapsuladas, pero solamente entre 15-25dde. Se relacionó el aumento de expresión de IgM y de amilasa observados hasta el 25dde en larvas alimentadas con microcapsulados. Reportes previos indican que la abundancia de Amilasa e IgM depende de la absorción completa del vitelo. Estos reportes no indican un decremento de ambos genes en el día 15 dde como nosotros lo observamos. Finalmente, creemos que la cuantificación relativa de la IgM debe reconocerse como una contribución muy importante, puesto que existen escasos trabajos relacionados con los niveles basales de detección y aún menos con la expresión génica en larvas de peces marinos.es_MX
dc.documento.subjectLarvas de Paralabrax maculatofasciatus; Microcapsulas; Poliaminas; PCR en tiempo real; Cuantificación genica relativa; amilasa; igmes_MX


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  • Tesis Digitales CIBNOR
    Esta colección contiene texto completo de las tesis de Maestría y Doctorado del Programa de Posgrado del CIBNOR.

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